UA-Glo® Fluorescent Cell Viability Assay

细胞活力检测有多种方法，如检测染料排除，ATP浓度变化，酶活性变化等。细胞检测有时需要进行细胞毒性的机制研究和/或设立内参对照，由此产生多重(multiplex) 分析需求，即对同一样品用多种分析方法检测，彼此检测机理不同，相互不干扰，如此可以进行相关对比，从而揭示细胞毒性的机制或排除系统差异。本公司的荧光细胞活力检测试剂盒（UA-Glo® Fluorescent Cell Viability Assay）对细胞活力的检测基于只存在于活细胞内的蛋白酶对多肽-荧光基团底物的降解会产生荧光信号，而细胞膜完整性受损时，该蛋白酶失去活性，不会产生荧光信号。UA-Glo® Fluorescent Cell Viability Assay与本公司的UA-Glo® Luminescent Cell Viability Assay（目录号UA070103）检测原理不同，可以检测到更早期的轻微的细胞损害，两个检测可以兼容进行多重检测。 UA-Glo® Fluorescent Cell Viability Assay也与本公司的UA-Glo® Caspases 3/7 细胞凋亡检测试剂盒（目录号UA079012）兼容，可以进行多重检测以确定细胞毒性的机制。

蛋白酶底物，缓冲液混合后灌装于 10 ml 或 100 ml 的棕色瓶中及 2ml 管中，规格如下：

1.细胞准备

1)在96孔或384孔细胞培养板铺合适密度的待检测细胞，建议使用黑框透明细胞培养板。

2)将合适浓度的待检测化合物加到细胞板孔中。培养液中有机溶剂浓度保持在1%以下。根据实验需求继续培养合适的时间。

2.细胞活力检测

1)取出荧光细胞活力检测试剂，CTF缓冲液完全溶解后平衡至室温。CTF底物涡旋振荡使其彻底混匀，瞬时离心收集CTF底物至管底 。

2)配制CTF反应液：CTF底物为100x，根据用量用CTF缓冲液配成1x反应液，充分混匀。

3)取出待测细胞培养板，每孔加入等体积的CTF反应液，例如100μl培养液加入100μl 1x CTF反应液 。

4)低速振板20 秒混匀，避光37 ℃ 反应60min 后进行荧光检测 。不同细胞对CTF底物切割速度不同，最佳读板时间需根据细胞优化。最快可以在加入试剂30分钟后进行读板。一般在60分钟或更长时间后读板的结果信噪比更高。建议读板时间最长不超过3hr。

5)在荧光读板仪上读取荧光信号，激发光Ex 380-400nm，发射光Em 505nm。

6)根据需要，继续进行下游的多重分析，例如Caspases 3/7 细胞凋亡检测。

1. 初次使用后建议将底物分装-20℃保存，每次新鲜配制反应液。

2. 非经严格验证，不建议随意改变反应试剂用量。