UA-Glo® Renilla Luciferase Assay System

UA-Glo 海肾荧光素酶检测试剂盒用于定量检测细胞或其它样品中的海肾荧光素酶 (Renilla luciferase) 含量。该试剂具有信噪比高、重复性好、稳定性好的特点。信号半衰期超过2小时。简便的配方减少了先裂解后检测的实验步骤，从而进一步减少了因为频繁加样导致的误差，且其稳定的辉光信号使该产品尤其适合高通量的样品检测。

海肾荧光素酶缓冲液灌装于10 ml 或100 ml的棕色瓶中，底物分装于2ml管中，规格如下：

1、在96孔或384孔细胞培养板铺合适密度的待检测细胞，转染合适质粒或带有相关海肾荧光素酶表达载体的稳定细胞株。建议使用白板。
2、根据项目需求对细胞进行相关处理，并继续培养合适的时间。
3、取出检测缓冲液及底物，在室温平衡20分钟。
4、取出待测细胞培养板，在室温平衡20分钟。
5、准备检测试剂，底物为100x 浓缩液，使用前用缓冲液配成1x工作液。注意避光。
6、加50 µl 的检测试剂到 100 µl 96 孔板细胞中, 或10 µl 试剂到20 µl 384 孔板细胞中，轻轻振荡30 秒，放置暗处继续裂解3分钟。
7、在luminescence 读板仪上读取荧光信号。
8、未使用完的试剂建议-20℃保存。

1.温度：荧光酶检测除特别注明之外，都是在室温（22-25℃）下进行的。温度对酶反应影响较大。

2.试剂量：非经严格验证，不建议随意改变反应试剂用量。

3.读板时间：在加入试剂后，振摇30秒，放置暗处3分钟之后读板。建议在10-30分钟内完成读板以获得最佳结果。

4.板间内参：如果需要进行板间数据比较，建议在所有反应板均设立两孔未加化合物的阳性对照作为板间内参，用板间内参读数对每块板读数先进行纠正（normalization），纠正后的数据再进行下游处理分析。

5.反应板：荧光读数高低可能对临近周围孔读数形成明显干扰，主要是荧光信号外溢。需要时可以使用不透明底的白板或黑板进行实验或验证。

6.试剂混合：不同批次的试剂，已经启用但未使用完而储存试剂及条件差别比较明显的试剂，不建议混合后使用。

7.分装储存：按照说明书分装储存反应试剂，保证试剂的稳定性。