采用CD8 Nanobeads、S或L Separation Column及磁性分选器从人PBMC中富集或去除CD8+ T细胞。随后使用anti-CD8 (clone:OKT8) Alexa Fluor®488进行荧光染色，并圈选活细胞群进行分析。
CD8 Nanobeads, human（RUO）
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Product Specification
| Reactivity | Human |
| Stability & Storage | 避光保存于2–8℃，不可冻存。 |
Background
CD8抗原与T细胞受体形成复合物，并在CD8+细胞毒性T细胞上作为辅助分子，协助TCR异二聚体识别MHC I类分子/肽复合物。CD8分子由α/β异二聚体或α/α同二聚体组成。它在细胞毒性T细胞上强表达，在部分NK细胞上弱表达。CD8表达于大多数胸腺细胞以及约三分之一的外周血T细胞上。CD8+细胞毒性T细胞在清除病毒感染细胞和肿瘤细胞中发挥重要作用。
Protocol
以S Separation Column为例
步骤 |
操作方法 |
剂量 / 时间 |
|
磁性标记 |
1 |
计数细胞总数 |
— |
2 |
细胞悬液400×g离心7分钟，完全吸弃上清 |
400×g,7 min |
|
3 |
每1×10⁷细胞加80 μL缓冲液重悬 Note: 缓冲液用量根据样品体积等比例调整 |
重悬细胞 |
|
4 |
每1×10⁷细胞加20 μL CD8 NanoBeads Note：细胞量增大时，所有试剂体积按比例同步增加 |
1×10⁷细胞加 20 μL |
|
5 |
充分混匀，2–8℃避光孵育15min |
孵育15 min |
|
6 |
每1×10⁷细胞加1 mL缓冲液洗涤，400×g离心7分钟，完全吸弃上清 |
1×10⁷细胞加1 mL |
|
7 |
500 μL缓冲液最多重悬1×108细胞 |
重悬细胞 |
|
磁性分选 |
8 |
将S型分选柱放入对应磁力分选器磁场中，500μL缓冲液润洗分选柱 |
润洗分选柱 |
9 |
将细胞悬液上样至分选柱，收集流出液（未标记细胞） |
— |
|
10 |
缓冲液洗涤柱子3次，每次500μL，待柱内液体完全流空后再加下一次 |
3×500 μL缓冲液 |
|
11 |
合并所有流出液为阴性组分；将分选柱移出磁场，置于收集管上 |
— |
|
12 |
向柱内加入1mL缓冲液，用配套柱塞快速、用力推压，洗脱磁性标记的阳性细胞 Note：如需更高纯度，换用新柱重复分选1次 |
收集目的细胞 |
以L Separation Column为例
步骤 |
操作方法 |
剂量 / 时间 |
|
磁性标记 |
1 |
计数细胞总数 |
— |
2 |
细胞悬液400×g离心7分钟，完全吸弃上清 |
400×g,7 min |
|
3 |
每1×10⁷细胞加80 μL缓冲液重悬 Note: 缓冲液用量根据样品体积等比例调整 |
重悬细胞 |
|
4 |
每1×10⁷细胞加20 μL CD8 NanoBeads Note：细胞量增大时，所有试剂体积按比例同步增加 |
1×10⁷细胞加 20 μL |
|
5 |
充分混匀，2–8℃避光孵育15min |
孵育15 min |
|
6 |
每 1×10⁷细胞加1 mL缓冲液洗涤，400×g 离心7分钟，完全吸弃上清 |
1×10⁷细胞加1 mL |
|
7 |
500 μL缓冲液最多重悬1×108细胞 |
重悬细胞 |
|
磁性分选 |
8 |
将L型分选柱放入对应磁力分选器磁场中, 3 mL缓冲液润洗分选柱 |
润洗分选柱 |
9 |
将细胞悬液上样至分选柱，收集流出液（未标记细胞） |
— |
|
10 |
缓冲液洗涤柱子3次，每次3 mL，待柱内液体完全流空后再加下一次 |
3×3 mL缓冲液 |
|
11 |
合并所有流出液为阴性组分；将分选柱移出磁场，置于收集管上 |
— |
|
12 |
向柱内加入5mL缓冲液，用配套柱塞快速、用力推压，洗脱磁性标记的阳性细胞 Note：如需更高纯度，换用新柱重复分选1次 |
收集目的细胞 |
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Validation Data
