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CD3 Nanobeads, human(RUO)

CD3 Nanobeads, human(RUO)

Catalog Number: S0K0011 Reactivity: Human Conjugation: Brand: Starter
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Regular price $285 USD
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Product Details

Product Specification


Reactivity Human
Stability & Storage

避光保存于2–8℃,不可冻存。

Background

CD3表达于所有T细胞表面,并与T细胞受体相关联。人外周血淋巴细胞中70–80% 为CD3+,胸腺细胞 65–85%为CD3+。CD3 Nanobeads所识别的抗原表位在CD3ε链上。

Protocol

以S Separation Column为例

步骤

操作方法

剂量 / 时间

磁性标记

1

计数细胞总数

2

细胞悬液400×g离心7分钟,完全吸弃上清

400×g,7 min

3

每1×10⁷细胞加80 μL缓冲液重悬

Note: 缓冲液用量根据样品体积等比例调整

重悬细胞

4

每1×10⁷细胞加20 μL CD3 NanoBeads

Note:细胞量增大时,所有试剂体积按比例同步增加

1×10⁷细胞加 20 μL

5

充分混匀,2–8℃避光孵育15min

孵育15 min

6

每1×10⁷细胞加1 mL缓冲液洗涤,400×g离心7分钟,完全吸弃上清

1×10⁷细胞加1 mL

7

500 μL缓冲液最多重悬1×108细胞

重悬细胞

磁性分选

8

将S型分选柱放入对应磁力分选器磁场中,500μL缓冲液润洗分选柱

润洗分选柱

9

将细胞悬液上样至分选柱,收集流出液(未标记细胞)

10

缓冲液洗涤柱子3次,每次500μL,待柱内液体完全流空后再加下一次

3×500 μL缓冲液

11

合并所有流出液为阴性组分;将分选柱移出磁场,置于收集管上

12

向柱内加入1mL缓冲液,用配套柱塞快速、用力推压,洗脱磁性标记的阳性细胞

Note:如需更高纯度,换用新柱重复分选1次

收集目的细胞


以L Separation Column为例

步骤

操作方法

剂量 / 时间

磁性标记

1

计数细胞总数

2

细胞悬液400×g离心7分钟,完全吸弃上清

400×g,7 min

3

每1×10⁷细胞加80 μL缓冲液重悬

Note: 缓冲液用量根据样品体积等比例调整

重悬细胞

4

每1×10⁷细胞加20 μL CD3 NanoBeads

Note:细胞量增大时,所有试剂体积按比例同步增加

1×10⁷细胞加 20 μL

5

充分混匀,2–8℃避光孵育15min

孵育15 min

6

每 1×10⁷细胞加1 mL缓冲液洗涤,400×g 离心7分钟,完全吸弃上清

1×10⁷细胞加1 mL

7

500 μL缓冲液最多重悬1×108细胞

重悬细胞

磁性分选

8

将L型分选柱放入对应磁力分选器磁场中, 3 mL缓冲液润洗分选柱

润洗分选柱

9

将细胞悬液上样至分选柱,收集流出液(未标记细胞)

10

缓冲液洗涤柱子3次,每次3 mL,待柱内液体完全流空后再加下一次

3×3 mL缓冲液

11

合并所有流出液为阴性组分;将分选柱移出磁场,置于收集管上

12

向柱内加入5mL缓冲液,用配套柱塞快速、用力推压,洗脱磁性标记的阳性细胞

Note:如需更高纯度,换用新柱重复分选1次

收集目的细胞


Picture

Validation Data

从人PBMC中富集或去除T细胞。细胞经anti-CD3 (clone: UCHT1) Brilliant Violet 421™染色,并圈选活细胞群进行分析。