CD19 Nanobeads, mouse（RUO）

步骤

操作方法

剂量 / 时间

磁性标记

1

取小鼠脾脏，置于40 μm无菌滤网上研磨，制备脾脏单细胞悬液；裂红处理后进行细胞计数

Note: 推荐细胞采用AO/PI染色后进行计数

—

2

细胞悬液400×g离心7分钟，完全吸弃上清

400×g,7 min

3

每1×10⁷细胞加80 μL缓冲液重悬

Note: 缓冲液用量根据样品体积等比例调整

重悬细胞

4

每1×10⁷细胞加20 μL CD19 Nanobeads, mouse

Note：细胞量增大时，所有试剂体积按比例同步增加

1×10⁷细胞加 20 μL

5

充分混匀，2–8℃避光孵育15min

孵育15 min

6

每1×10⁷细胞加1 mL缓冲液洗涤，400×g 离心7分钟，完全吸弃上清

1×10⁷细胞加1 mL

7

500 μL缓冲液最多重悬1×10⁸细胞

重悬细胞

磁性分选

8

将S型分选柱放入对应磁力分选器磁场中，500 μL缓冲液润洗分选柱

润洗分选柱

9

将细胞悬液上样至分选柱，收集流出液（未标记细胞）

—

10

缓冲液洗涤柱子3次，每次500μL，待柱内液体完全流空后再加下一次

3×500 μL缓冲液

11

合并所有流出液为阴性组分；将分选柱移出磁场，置于收集管上

—

12

向柱内加入1mL缓冲液，用配套柱塞快速、用力推压，洗脱磁性标记的阳性细胞

Note：如需更高纯度，换用新柱重复分选1次

收集目的细胞

步骤

操作方法

剂量 / 时间

磁性标记

1

取小鼠脾脏，置于40 μm无菌滤网上研磨，制备脾脏单细胞悬液；裂红处理后进行细胞计数

Note: 推荐细胞采用AO/PI染色后进行计数

—

2

细胞悬液400×g离心7分钟，完全吸弃上清

400×g,7 min

3

每1×10⁷细胞加80 μL缓冲液重悬

Note: 缓冲液用量根据样品体积等比例调整

重悬细胞

4

每1×10⁷细胞加20 μL CD19 Nanobeads, mouse

Note：细胞量增大时，所有试剂体积按比例同步增加

1×10⁷细胞加 20 μL

5

充分混匀，2–8℃避光孵育15min

孵育15 min

6

每1×10⁷细胞加1 mL缓冲液洗涤，400×g离心7分钟，完全吸弃上清

1×10⁷细胞加1 mL

7

500 μL缓冲液最多重悬1×10⁸细胞

重悬细胞

磁性分选

8

将L型分选柱放入对应磁力分选器磁场中，3 mL缓冲液润洗分选柱

润洗分选柱

9

将细胞悬液上样至分选柱，收集流出液（未标记细胞）

—

10

缓冲液洗涤柱子3次，每次3 mL，待柱内液体完全流空后再加下一次

3×3 mL缓冲液

11

合并所有流出液为阴性组分；将分选柱移出磁场，置于收集管上

—

12

向柱内加入5mL缓冲液，用配套柱塞快速、用力推压，洗脱磁性标记的阳性细胞

Note：如需更高纯度，换用新柱重复分选1次

收集目的细胞