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Streptavidin Nanobeads（120 nm）

Streptavidin Nanobeads（120 nm）

Catalog Number: S0K3012 Reactivity: Human, Mouse Conjugation: Brand: Starter
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$200 USD
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Product Details

Product Specification


Reactivity Human, Mouse
Stability & Storage

避光保存于 2–8 ℃，不可冻存。

Background

Streptavidin Nanobeads（120 nm）旨在根据生物素化抗体或配体标记的表面标志物对细胞进行分离。

Protocol

以Mouse T无柱阴选为例

Note:为了达到更好的分选效果，建议在推荐磁珠用量基础上进行磁珠用量摸索

步骤

操作说明

剂量和时间

1

取小鼠脾脏，置于40 μm无菌滤网上研磨，制备脾脏单细胞悬液；裂红处理后进行细胞计数;

Note: 推荐细胞采用AO/PI染色后进行计数；脾细胞可以采用400 g离心7 min；

制备样本

2

用100μL MagSep Separation Buffer重悬1×107细胞;

Note:试剂根据样品体积等比例调整；留分选前样本检测初始Mouse T比例；

1×107 cells/100 μL

3

加入10 μL Mouse T cell Biotin Antibody Cocktail 至样品中，轻轻混匀；

Note: 本步骤混匀可采用移液器轻轻吹匀2-3下；

10 μL /100 μL

4

Cocktail中的抗体和细胞进行孵育, 室温孵育10 min；

室温孵育10 min

5

震荡5-30 s，混匀Streptavidin Nanobeads（120 nm）；

混匀5-30 s

6

加5 μL Streptavidin Nanobeads（120 nm）至样品中；

5 μL/100 μL

7

轻柔混匀磁珠和细胞，室温孵育5min；

Note: 本步骤混匀可采用移液器轻轻吹匀2-3 下；

本步骤磁珠会出现沉底的情况，可以在2.5min时，轻弹混匀一下；

室温孵育5min

8

加MagSep Separation Buffer到样品中，立即放置在环形磁极上，防止磁珠大量沉底；

总体积加至2.5 mL（5 mL流式管）

9

样品置于环形磁极上，使磁珠吸附在管壁上；

吸附10 min

10

倾斜磁力架，将样品倒入新的收集管中，收集样品；

Note: 分选的细胞可采用400g离心7min，用于后续培养和分析。

细胞分选成功

Note: 0.1-1 × 10^8 cells（0.1-1mL）推荐使用5 mL单孔磁极(Starter EasyIso Separator)吸附总体积为2.5mL；


Picture

Validation Data

采用Streptavidin Nanobeads（120 nm）和Mouse T cell Biotin Antibody Cocktail，从小鼠脾细胞中富集T细胞。使用CD19- Alexa Fluor® 647 (SDT Cat: S0B5445)、CD3- Alexa Fluor® 488 (SDT Cat: S0B8364)荧光抗体进行染色，以活细胞（Live+）设门进行分析, 检测分选组分中T细胞的比例；流式细胞术检测结果表明，本次分选后T细胞纯度为98.4%。