1 1

Mouse Naïve CD4 T Cell Isolation Kit (Column-Free)

Mouse Naïve CD4 T Cell Isolation Kit (Column-Free)

Catalog Number: S0K0014 Reactivity: Mouse Conjugation: Brand: Starter
Share:
Price:
$800 USD
$800 USD
Size:

For shipping services or bulk orders, you may request a quotation.
Secure checkout with
View full details

Product Details

Product Specification


Reactivity Mouse
Stability & Storage

避光保存于 2–8 ℃，不可冻存。

Background

Mouse Naïve CD4 T 细胞指从未接触过特异性抗原、处于静息状态的成熟CD4 T细胞。它是所有效应性 CD4 T 细胞（Th1/Th2/Th17/Treg 等）的共同前体，也是研究T细胞活化、分化与功能机制的模型。通过无柱式Mouse Naïve CD4 T细胞分选试剂盒，可快速纯化获得未接触抗体的初始CD4 T细胞。该方法在分选过程中仅去除非靶细胞，而不标记或激活目标初始CD4 T细胞，能够保留细胞的天然表型与功能完整性，适用于后续的细胞培养及功能学检测。

Components



Protocol

步骤

操作说明

剂量和时间

1

取小鼠脾脏，置于40 μm无菌滤网上研磨，制备脾脏单细胞悬液；裂红处理后进行细胞计数;

Note: 推荐细胞采用AO/PI染色后进行计数；脾细胞可以采用400 g离心7 min；

制备样本

2

用100μL MagSep Separation Buffer重悬1×107细胞;

Note:试剂根据样品体积等比例调整；留分选前样本检测Naïve CD4比例；

1×107 cells/100 μL

3

加入10 μL Mouse Naïve CD4 T cell Biotin Antibody Cocktail 至样品中，轻轻混匀；

Note: 本步骤混匀可采用移液器轻轻吹匀2-3下；

10 μL /100 μL

4

Cocktail中的抗体和细胞进行孵育, 室温孵育10 min；

室温孵育10 min

5

震荡5-30 s，混匀Streptavidin beads；

混匀5-30 s

6

加10 μL Streptavidin beads至样品中；

10 μL/100 μL

7

轻柔混匀磁珠和细胞，室温孵育5min；

Note: 本步骤混匀可采用移液器轻轻吹匀2-3 下；

本步骤磁珠会出现沉底的情况，可以在2.5min时，轻弹混匀一下；

室温孵育5min

8

加MagSep Separation Buffer到样品中，立即放置在磁极上，防止磁珠大量沉底；

总体积加至2.5 mL（5 mL流式管）

9

样品置于单孔磁极上，使磁珠吸附在管壁上；

单孔磁力架吸附10 min

10

倾斜磁力架，将样品倒入新的收集管中，收集样品；

Note: 分选的细胞可采用400g离心7min，用于后续培养和分析。

细胞分选成功

Note: 0.1-1 × 108 cells（0.1-1mL）推荐使用5 mL单孔磁极(Starter EasyIso Separator)吸附总体积为2.5mL；


Picture

Validation Data

采用Naïve CD4 T无柱式分选试剂盒，从小鼠脾细胞中富集Naïve CD4 T细胞。使用CD4-Pacific Blue、CD44-FITC、CD62L-Alexa Fluor® 647荧光抗体进行染色，以活细胞（Live+）设门进行分析, 检测分选组分中Naïve CD4 T细胞（CD4+CD44-CD62L+）的比例；流式细胞术检测结果表明，本次分选后Naïve CD4 T细胞纯度为95.5%。