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Mouse Naïve CD4 T Cell Isolation Kit (Column-Free)

Mouse Naïve CD4 T Cell Isolation Kit (Column-Free)

Catalog Number: S0K0014 Reactivity: Mouse Conjugation: Brand: Starter
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$800 USD
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Product Details

Product Specification


Format

1 mL Mouse Naïve CD4 T Cell Biotin-Antibody Cocktail

1mL Streptavidin Beads
Capacity

Suitable for a total cell count of 1×10⁹, and can perform up to 100 sorting runs.
Principle of Separation

In this negative selection process, non-target cells are labeled with biotin-conjugated antibodies, and the cells are then incubated with streptavidin-nanomagnetic beads. The non-target cells are marked by the antibody‑bead complex, while the targetNaïve CD4 Tcells remain unlabeled. Subsequently, the cell suspension is transferred to a polystyrene tube and placed within the sorter's magnetic field. Under the influence of the magnetic field, the magnetically labeled non-target cells adhere to the tube wall, whereas the unlabeledNaïve CD4 Tcells remain in the supernatant. This supernatant constitutes theNaïve CD4 Tcell-enriched fraction after removal of the non-target cells.Naïve CD4 Tcell fraction.
Applications in cell sorting Naïve CD4 T cells in their native, unmanipulated state are sorted from a single-cell suspension of fresh mouse spleen and can be used for a variety of downstream functional assays.
Reactivity Mouse
Magnetic Bead Size 150 nm
Separation Method Column-Free
Selection Strategy Negative Selection
Stability & Storage

避光保存于 2–8 ℃，不可冻存。

Background

Mouse Naive CD4⁺ T 细胞（初始 CD4 阳性 T 淋巴细胞），是尚未接触特异性抗原、未发生活化增殖分化的成熟 CD4⁺T 细胞。流式细胞术经典界定表型为CD4⁺CD44⁻CD62L⁺，CD62L（L-selectin）是淋巴结归巢关键受体，特异性高表达于静息初始T细胞，细胞活化或受机械、温度应激时会被ADAM17金属蛋白酶快速剪切脱落；CD44为活化与记忆T细胞标志性黏附分子，静息Naive CD4⁺T细胞几乎不表达。基于该特征，可精准区分初始T细胞（CD44⁻CD62L⁺）、中央记忆T细胞（CD44⁺CD62L⁺）与效应记忆T细胞（CD44⁺CD62L⁻）。细胞纯度是Naive CD4⁺T细胞功能实验的核心前提，本试剂盒采用免疫磁珠阴性分选技术，通过生物素化抗体特异性标记B细胞、CD8⁺T细胞、髓系细胞、活化/记忆T细胞等非目标杂细胞，结合链霉亲和素磁珠特异性去除杂细胞，全程不标记、不接触目标Naive CD4⁺T细胞，最大程度保留细胞静息表型、活性与分化潜能，可高效获得高纯度、高活性、未活化的Untouched Naive CD4⁺T细胞，适配体外极化培养、细胞活化检测、免疫机制研究等各类实验场景。

Components



Protocol

步骤

操作说明

剂量和时间

1

取小鼠脾脏，置于40 μm无菌滤网上研磨，制备脾脏单细胞悬液，使用红细胞裂解液Red Blood Cell Lysis Buffer (不含固定剂,1X)（Cat:S0D9002）裂红处理后进行细胞计数;

Note:研磨、过滤、洗涤全程使用预冷试剂，动作轻柔，禁止强力涡旋；推荐细胞采用 AO/PI 染色后进行计数；脾细胞可以采用400 g离心7 min；

制备样本

2

用预冷的100μL MagSep Separation Buffer重悬1×107细胞;

Note:试剂根据样品体积等比例调整；留分选前样本检测Naïve CD4比例；

1×107 cells/100 μL

3

加入10 μL Mouse Naïve CD4 T cell Biotin Antibody Cocktail 至样品中，轻轻混匀；

Note: 本步骤混匀可采用移液器轻轻吹匀2-3下；

10 μL /100 μL

4

Cocktail中的抗体和细胞进行孵育, 2-8℃孵育10 min；

2-8℃孵育10 min

5

震荡5-30 s，混匀Streptavidin beads；

混匀5-30 s

6

加10 μL Streptavidin beads至样品中；

10 μL/100 μL

7

轻柔混匀磁珠和细胞，2-8℃孵育5min；

Note: 本步骤混匀可采用移液器轻轻吹匀2-3 下；

本步骤磁珠会出现沉底的情况，可以在2.5min时，轻弹混匀一下；

2-8℃孵育5min

8

加预冷的MagSep Separation Buffer到样品中，立即放置在磁极上，防止磁珠大量沉底；

总体积加至2.5 mL（5 mL流式管）

总体积加至7.5 mL（15 mL离心管）

9

样品置于磁极上，使磁珠吸附在管壁上；

单孔磁力架吸附（3 min）

联排磁力架吸附（5 min）

10

倾斜磁力架，将样品倒入新的收集管中，收集样品；

Note: 分选的细胞可采用400g离心7min，用于后续培养和分析。

细胞分选成功

Note: 1. 0.1-1 × 108 cells（0.1-1mL）推荐使用5 mL单孔磁极(Starter EasyIso Separator)吸附总体积为2.5mL；

2-5 ×108 cells（2-5mL）推荐使用15 mL联排磁极(Starter EasyEights EasyIso Separator)吸附总体积为7.5mL；

2. 全程注意控制温度，分选Buffer全程预冷，分选完后立即进行后续实验，流式检测2-8℃避光染色，避免室温长时间放置。


Picture

Validation Data

采用Naïve CD4 T无柱式分选试剂盒，从小鼠脾细胞中富集Naïve CD4 T细胞。使用CD4-Pacific Blue、CD44-FITC、CD62L-Alexa Fluor® 647荧光抗体进行染色，以活细胞（Live+）设门进行分析, 检测分选组分中Naïve CD4 T细胞（CD4+CD44-CD62L+）的比例；流式细胞术检测结果表明，本次分选后Naïve CD4 T细胞纯度为95.5%。