Mouse Lineage Cell Depletion Kit (Column-Based)

步骤

操作说明

剂量和时间

细胞处理及标记

1

取小鼠骨髓，制备单细胞悬液，进行细胞计数;

Note: 小鼠骨髓需使用红细胞裂解液Red Blood Cell Lysis Buffer (不含固定剂,1X)（Cat:S0D9002）进行裂红处理; 推荐细胞采用AO/PI染色后进行计数;

制备样本

2

用预冷的100μL MagSep Separation Buffer（Cat:S0D3018）重悬1×10⁷活细胞;

Note:试剂根据样品体积等比例调整；留分选前样本检测Lin-细胞比例；

1×10⁷ cells/100 μL

3

加入10 μL Mouse Lineage Cell Depletion Biotin-Antibody Cocktail至样品中，轻轻混匀；

Note: 本步骤混匀可采用移液器轻轻吹匀2-3下；

10 μL/100 μL

4

Cocktail中的抗体和细胞进行孵育，2-8℃孵育10 min；

2-8℃孵育10 min

5

加入10倍细胞体积预冷的MagSep Separation Buffer洗涤细胞，400g离心7min后去上清，重悬至原体积；

400g离心7min

6

混匀Streptavidin NanoBeads，加10 μL Streptavidin NanoBeads至样品中；

10 μL/100 μL

7

轻柔混匀磁珠和细胞，2-8℃孵育5 min；

Note: 本步骤混匀可采用移液器轻轻吹匀2-3下；

2-8℃孵育5 min

细胞分选

8

在柱分选磁极中，装上L Separation Column，加入3 mL MagSep Separation Buffer，润洗分选柱；

润洗分选柱

9

将细胞加入到分选柱中，并用收集管收集目的细胞；

Note: 细胞体积最少为1mL，不足则用MagSep Separation Buffer补齐；随重力滴落的细胞为目的细胞；

收集目的细胞

10

分3次加入3 mL MagSep Separation Buffer，收集目的细胞；

Note: 本步骤洗脱分选柱未标记的目的细胞，提高得率。

收集目的细胞

Notes:  1. 注意分选柱的最大承载量，S Separation Column标记细胞数最大为1×10⁷；L Separation Column最大标记细胞数为1×10⁸；

2. 全程注意控制温度，分选Buffer全程预冷，避免室温长时间放置。