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Human Pan B Cell Isolation Kit (Column-Free)

Human Pan B Cell Isolation Kit (Column-Free)

Catalog Number: S0K3017 Reactivity: Human Conjugation: Brand: Starter
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$1,170 USD
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Product Details

Product Specification


Reactivity Human
Magnetic Bead Size 150 nm
Separation Method Column-Free
Selection Strategy Negative Selection
Stability & Storage

避光保存于2–8 ℃，不可冻存。

Background

Human Pan B细胞是人体体液免疫应答的核心细胞群体，可分化产生特异性抗体并介导免疫记忆形成，是机体适应性免疫体系的重要组成部分，广泛参与免疫防御、免疫调节及多种免疫相关疾病的发生发展过程。Human Pan B细胞阴选试剂盒基于免疫磁珠阴性分选技术研发，规避了阳性分选存在的抗体结合标记缺陷，可特异性清除T细胞、NK细胞、单核细胞、粒细胞、血小板和红细胞等各类非目标细胞。该分选体系的抗体组分不含CD43，能够有效避免CD43阳性B细胞亚群损耗，完整保留初始B细胞、记忆性B细胞、浆细胞等多种B细胞谱系。所得高纯度Pan B细胞无外源标记、原生状态完好，最大程度保留了细胞增殖、分化及抗体分泌的生物学潜能，可充分适配各类体外功能实验，是目前科研领域分离纯化人Pan B细胞的主流工具。

Protocol

步骤

操作说明

剂量和时间

1

从外周血通过淋巴细胞分离液密度梯度离心，分离PBMC或直接复苏冻存的PBMC细胞，进行细胞计数；

Note：推荐细胞采用AO/PI染色后进行计数；PBMC可以采用400 g离心7 min；

制备样本

2

用100 μL MagSep Separation Buffer重悬1×107细胞；

Note：试剂根据样品体积等比例调整；留分选前样本检测Human Pan B细胞比例；

1×107 cells/100 μL

3

加入10 μL Human Pan B Cell Biotin Antibody Cocktail至样品中，轻轻混匀。

Note：本步骤混匀可采用移液器轻轻吹匀2-3下；

10 μL /100 μL

4

Cocktail中的抗体和细胞进行孵育，室温孵育10 min；

室温孵育10 min

5

抗体孵育结束后，加入2倍体积的MagSep Separation Buffer，400 g离心7 min，随后小心弃去上清液。加入100 μL MagSep Separation Buffer重悬1×107细胞，进行后续步骤；

加入2倍体积buffer洗涤抗体

6

震荡5-30 s，混匀Streptavidin beads；

混匀5-30 s

7

加12.5 μL Streptavidin beads至样品中；

12.5 μL/100 μL

8

轻柔混匀磁珠和细胞，室温孵育8 min；

Note：本步骤混匀可以采用移液器轻轻吹匀2-3下；

本步骤中磁珠会出现沉底的情况，可以在4 min时，再次混匀一下；

室温孵育8 min

9

加MagSep Separation Buffer到样品中，立即放置在磁极上，防止磁珠大量沉底；

总体积加至2.5 mL（5 mL流式管）

总体积加至7.5 mL（15 mL离心管）

10

样品置于磁极上，使磁珠吸附在管壁上；

单孔磁力架吸附（4 min）

联排磁力架吸附（5 min）

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倾斜磁力架，将样品倒入新的收集管中，收集样品；

Note：分选的细胞可采用400 g离心7 min，用于后续培养和分析。

细胞分选成功

Note：1. 0.1-1×108 cells（0.1-1 mL）推荐使用5 mL单孔磁极（Starter EasyIso Separator）吸附总体积为2.5 mL；

2-5×108 cells（2-5 mL）推荐使用15 mL联排磁极（Starter EasyEights EasyIso Separator）吸附总体积为7.5 mL；

2. 若样本活率偏低，建议使用去死细胞试剂盒去除死细胞（Dead Cell Removal Set, (RUO)#S0K0009）；


Picture

Validation Data

从人外周血单个核细胞（PBMCs）中富集Human Pan B细胞，分选后细胞使用CD19-APC（Clone: HIB19）、CD43-PE（Clone: CD43-10G7）荧光抗体进行染色，以活细胞（Live⁺）设门进行分析, 检测分选组分中Pan B细胞的比例。流式细胞术检测结果表明，本次分选后CD19⁺（包含CD43⁺和CD43⁻）细胞纯度为95.85%。