1 1

Human NK Cell Isolation Kit (Column-Based)

Human NK Cell Isolation Kit (Column-Based)

Catalog Number: S0K1009 Reactivity: Human Conjugation: Brand: Starter
Share:
Price:
$1,000 USD
$1,000 USD
Size:

For shipping services or bulk orders, you may request a quotation.
Secure checkout with
View full details

Product Details

Product Specification


Reactivity Human
Stability & Storage

避光保存于 2–8 ℃，不可冻存。

Background

Human NK 细胞（Natural Killer Cells）是固有免疫核心效应细胞，占外周血淋巴细胞5%–20%，无需抗原致敏即可直接杀伤病毒感染细胞与肿瘤细胞，并分泌大量细胞因子调控免疫应答，是肿瘤免疫、抗感染免疫与免疫治疗的关键研究对象。通过NK细胞负选分离试剂盒分离得到的NK细胞，适用于表面分子直接标记可能干扰下游应用的研究场景；目的NK细胞可立即用于流式细胞术、培养或DNA/RNA提取等下游应用。

Protocol

以L Separation Column为例

步骤

操作说明

剂量和时间

细胞处理及标记

1

从外周血通过淋巴细胞分离液密度梯度离心，分离 PBMC或直接复苏冻存的PBMC细胞，进行细胞计数。

Note: 推荐细胞采用 AO/PI 染色后进行计数；PBMC可以采用400 g离心7 min；

制备样本

2

用100μL MagSep Separation Buffer重悬1×107细胞;

Note:试剂根据样品体积等比例调整；留分选前样本检测Human NK细胞比例；

1×107 cells/100 μL

3

加入10 μL Human NK cell Biotin Antibody Cocktail至样品中，轻轻混匀；

Note: 本步骤混匀可采用移液器轻轻吹匀2-3下；

10 μL/100 μL

4

Cocktail中的抗体和细胞进行孵育，室温孵育10 min；

室温孵育10 min

5

混匀Streptavidin Beads，加20 μL Streptavidin Beads至样品中；

20 μL/100 μL

6

轻柔混匀磁珠和细胞，室温孵育5 min；

室温孵育5 min

细胞分选

7

在柱分选磁极中，装上L Separation Column，加入3 mL MagSep Separation Buffer，润洗分选柱；

润洗分选柱

8

将细胞加入到分选柱中，并用收集管收集目的细胞；

Note: 细胞体积最少为500 μL，不足则用MagSep Separation Buffer补齐；随重力滴落的细胞为目的细胞；

收集目的细胞

9

加入3 mL MagSep Separation Buffer，收集目的细胞；

Note: 本步骤洗脱分选柱未标记的目的细胞，提高得率。

收集目的细胞

Notes: 注意分选柱的最大承载量，S Separation Column标记细胞数最大为1×107；L Separation Column最大标记细胞数为1×108；


Picture

Validation Data

从人外周血单个核细胞（PBMCs）中富集Human NK细胞。细胞经CD56-Alexa Fluor® 647 (SDT Cat: S0B8402) 和CD3-Alexa Fluor® 488 (SDT Cat: S0B1636)荧光染色后，以活细胞（Live+）设门进行分析, 流式细胞术检测结果表明，本次分选后Human NK细胞纯度为91.6%。