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Human Neutrophil Isolation Kit (Column-Free)

Human Neutrophil Isolation Kit (Column-Free)

Catalog Number: S0K3016 Reactivity: Human Conjugation: Brand: Starter
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$1,335 USD
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Product Details

Product Specification


Reactivity Human
Magnetic Bead Size 150 nm
Separation Method Column-Free
Selection Strategy Negative Selection
Stability & Storage

避光保存于 2–8 ℃，不可冻存。

Background

人中性粒细胞是人体外周血中含量最丰富的固有免疫髓系细胞，核心表型为CD16+CD66b+，是机体抵御细菌、真菌感染的第一道防线，同时广泛参与炎症反应、免疫调节、组织损伤修复及自身免疫性疾病、肿瘤微环境调控等关键生理病理过程。高质量、高活性、高纯度的原代中性粒细胞分离，是开展细胞功能验证、炎症机制研究、药物筛选及免疫相关基础科研的核心前提。

本试剂盒基于免疫磁珠阴性分选技术开发，采用生物素化抗体特异性标记并去除外周血中的T细胞、B细胞、NK细胞、单核细胞、嗜碱性粒细胞、及红细胞等非目标细胞，全程不标记、不触碰目标中性粒细胞。分离所得细胞可直接应用于流式细胞术检测、细胞活化与功能实验、炎症因子分泌检测、体外药物干预实验等各类下游科研场景，为免疫炎症相关机制研究提供稳定可靠的细胞分离解决方案。

Protocol

步骤

操作说明

剂量和时间

1

取人新鲜外周血，需使用红细胞裂解液Red Blood Cell Lysis Buffer (不含固定剂,1X)（Cat:S0D9002）进行裂红处理; 制备单细胞悬液后，进行细胞计数;

Note:推荐细胞采用AO/PI染色后进行计数;

制备样本

2

用100μL MagSep Separation Buffer（Cat:S0D3018）重悬1×107细胞;

Note:试剂根据样品体积等比例调整； 留分选前样本检测Human Neutrophil比例；

1×107 cells/100 μL

3

加入10 μL Human Neutrophil Biotin Antibody Cocktail至样品中，轻轻混匀；

Note: 本步骤混匀可采用移液器轻轻吹匀2-3下；

10 μL/100 μL

4

Cocktail中的抗体和细胞进行孵育, 2-8℃孵育10 min；

2-8℃孵育10 min

5

震荡涡旋5-30 s，混匀Streptavidin beads；

混匀5-30 s

6

加15 μL Streptavidin beads至样品中；

15 μL/100 μL

7

轻柔混匀磁珠和细胞，2-8℃孵育5 min；

Note: 本步骤混匀可采用移液器轻轻吹匀2-3 下；

本步骤磁珠会出现沉底的情况，可以在中间轻弹混匀两次；

2-8℃孵育5 min；

8

加MagSep Separation Buffer到样品中，立即放置在磁极上，防止磁珠大量沉底；

总体积加至2.5 mL（5 mL流式管）

总体积加至7.5 mL（15 mL离心管）

9

样品置于磁极上，使磁珠吸附在管壁上；

单孔磁力架吸附（3 min）

联排磁力架吸附（5 min）

10

倾斜磁力架，将样品倒入新的收集管中，收集样品；

Note: 分选的细胞可采用400g离心7min，用于后续培养和分析。

细胞分选成功

Note: 0.1-1 × 108 cells（0.1-1mL）推荐使用5 mL单孔磁极(Starter EasyIso Separator)吸附总体积为2.5mL；

2-5 ×108 cells（2-5mL）推荐使用15 mL联排磁极(Starter EasyEights EasyIso Separator)吸附总体积为7.5mL；


Picture

Validation Data

采用Human Neutrophil无柱式阴选试剂盒，从人新鲜血液中富集中性粒细胞。使用CD66B-Alexa Fluor® 488 (SDT Cat: S0B8109)、CD16- Alexa Fluor® 647 (SDT Cat: S0B5525)荧光抗体进行染色，以活细胞（Live+）设门进行分析, 检测分选组分中中性粒细胞的比例；流式细胞术检测结果表明，本次分选后中性粒细胞纯度为97.1%。