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Human Neutrophil Isolation Kit (Column-Based)

Human Neutrophil Isolation Kit (Column-Based)

Catalog Number: S0K1017 Reactivity: Human Conjugation: Brand: Starter
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$1,335 USD
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Product Details

Product Specification


Reactivity Human
Magnetic Bead Size 20 nm
Separation Method Column-Based
Selection Strategy Negative Selection
Stability & Storage

避光保存于 2–8 ℃，不可冻存。

Background

人中性粒细胞是人体外周血中含量最丰富的固有免疫髓系细胞，核心表型为CD16+CD66b+，是机体抵御细菌、真菌感染的第一道防线，同时广泛参与炎症反应、免疫调节、组织损伤修复及自身免疫性疾病、肿瘤微环境调控等关键生理病理过程。高质量、高活性、高纯度的原代中性粒细胞分离，是开展细胞功能验证、炎症机制研究、药物筛选及免疫相关基础科研的核心前提。

本试剂盒基于免疫磁珠阴性分选技术开发，采用生物素化抗体特异性标记并去除外周血中的T细胞、B细胞、NK细胞、单核细胞、嗜碱性粒细胞、及红细胞等非目标细胞，全程不标记、不触碰目标中性粒细胞。分离所得细胞可直接应用于流式细胞术检测、细胞活化与功能实验、炎症因子分泌检测、体外药物干预实验等各类下游科研场景，为免疫炎症相关机制研究提供稳定可靠的细胞分离解决方案。

Protocol

以L Separation Column为例

步骤

操作说明

剂量和时间

细胞处理及标记

1

取人新鲜外周血，需使用红细胞裂解液Red Blood Cell Lysis Buffer (不含固定剂,1X)（Cat:S0D9002）进行裂红处理; 制备单细胞悬液后，进行细胞计数;

Note:推荐细胞采用AO/PI染色后进行计数;

制备样本

2

用100μL MagSep Separation Buffer（Cat:S0D3018）重悬1×107细胞;

Note:试剂根据样品体积等比例调整； 留分选前样本检测Human Neutrophil比例；

1×107 cells/100 μL

3

加入10 μL Human Neutrophil Biotin Antibody Cocktail至样品中，轻轻混匀；

Note: 本步骤混匀可采用移液器轻轻吹匀2-3下；

10 μL/100 μL

4

Cocktail中的抗体和细胞进行孵育, 2-8℃孵育10 min；

2-8℃孵育10 min

5

加入10倍细胞体积的MagSep Separation Buffer洗涤细胞，400g离心7min后去上清，重悬至原体积；

400g离心7min

6

混匀Streptavidin Beads，加15 μL Streptavidin Beads至样品中；

15 μL/100 μL

7

轻柔混匀磁珠和细胞，2-8℃孵育5 min；

2-8℃孵育5 min

细胞分选

8

在柱分选磁极中，装上L Separation Column，加入 3 mL MagSep Separation Buffer，润洗分选柱；

润洗分选柱

9

将细胞加入到分选柱中，并用收集管收集目的细胞；

Note: 细胞体积最少为1mL，不足则用MagSep Separation Buffer补齐；随重力滴落的细胞为目的细胞；

收集目的细胞

10

分3次加入3 mL MagSep Separation Buffer，收集目的细胞；

Note: 本步骤洗脱分选柱未标记的目的细胞，提高得率。

收集目的细胞

Notes: 注意分选柱的最大承载量，S Separation Column标记细胞数最大为1×107；L Separation Column最大标记细胞数为1×108；


Picture

Validation Data

采用Human Neutrophil有柱式阴选试剂盒，从人新鲜血液中富集中性粒细胞。使用CD66B-Alexa Fluor® 488 (SDT Cat: S0B8109)、CD16- Alexa Fluor® 647 (SDT Cat: S0B5525)荧光抗体进行染色，以活细胞（Live+）设门进行分析, 检测分选组分中中性粒细胞的比例；流式细胞术检测结果表明，本次分选后中性粒细胞纯度为97.5%。