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Human Naïve CD8 T Cell Isolation Kit (Column-Free)

Human Naïve CD8 T Cell Isolation Kit (Column-Free)

Catalog Number: S0K3019 Reactivity: Human Conjugation: Brand: Starter
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$1,250 USD
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Product Details

Product Specification


Reactivity Human
Magnetic Bead Size 150 nm
Separation Method Column-Free
Selection Strategy Negative Selection
Stability & Storage

避光保存于2–8 ℃，不可冻存。

Background

Human Naive CD8⁺ T细胞是适应性细胞免疫应答的核心起始细胞群体，指未接触过特异性抗原、处于静息状态的CD8⁺ T细胞亚群，典型表型为CD8⁺CD45RO⁻CD45RA⁺CCR7⁺。该类细胞可在抗原刺激及细胞因子调控下活化增殖，分化为效应及记忆性CD8⁺ T细胞，在抗感染免疫、肿瘤免疫、自身免疫疾病研究中占据重要地位，是适应性免疫领域的重要研究对象。Human Naive CD8⁺ T细胞阴选试剂盒基于免疫磁珠阴性分选技术研发，规避了阳性分选存在的抗体结合标记缺陷，分选体系中的抗体组分精准靶向非Naive CD8⁺ T 细胞表面标志物，特异性清除CD4⁺ T细胞、记忆性CD8⁺ T细胞、B细胞、NK细胞、单核细胞、粒细胞及红细胞等非目标细胞群体。所得高纯度Human Naive CD8⁺ T细胞无外源标记、无磁珠残留、原生状态完好，最大程度保留了细胞增殖、分化的生物学潜能，可充分适配各类体外功能实验，是目前科研领域分离纯化Human Naive CD8⁺ T细胞的主流工具。

Protocol

Note：本试剂盒不包含分选buffer，需自备，斯达特对应货号为S0D3018。

步骤

操作说明

剂量和时间

1

从外周血通过淋巴细胞分离液密度梯度离心，分离PBMC或直接复苏冻存的PBMC细胞，进行细胞计数；

Note：推荐细胞采用AO/PI染色后进行计数；PBMC可以采用400 g离心7 min；

制备样本

2

用100 μL MagSep Separation Buffer重悬1×107细胞；

Note：试剂根据样品体积等比例调整；留分选前样本检测Human Naïve CD8 T细胞比例；

1×107 cells/100 μL

3

加入10 μL Human Naïve CD8 T Cell Biotin-Antibody Cocktail至样品中，轻轻混匀。

Note：本步骤混匀可采用移液器轻轻吹匀2-3下；

10 μL/100 μL

4

Cocktail中的抗体和细胞进行孵育，4 ℃或室温孵育10 min；

4 ℃或室温孵育10 min

5

抗体孵育结束后，加入2倍体积的MagSep Separation Buffer，400 g离心7 min，随后小心弃去上清液。加入100 μL MagSep Separation Buffer重悬1×107细胞，进行后续步骤；

加入2倍体积buffer洗涤抗体

6

震荡5-30 s，混匀Streptavidin beads；

混匀5-30 s

7

加15 μL Streptavidin beads至样品中；

15 μL/100 μL

8

轻柔混匀磁珠和细胞，4 ℃或室温孵育8 min；

Note：本步骤混匀可以采用移液器轻轻吹匀2-3下；

本步骤中磁珠会出现沉底的情况，可以在4 min时，再次混匀一下；

4 ℃或室温孵育8 min

9

加MagSep Separation Buffer到样品中，立即放置在磁极上，防止磁珠大量沉底；

总体积加至2.5 mL（5 mL流式管）

总体积加至7.5 mL（15 mL离心管）

10

样品置于磁极上，使磁珠吸附在管壁上；

单孔磁力架吸附（3 min）

联排磁力架吸附（5 min）

11

倾斜磁力架，将样品倒入一个新吸附管中，重复步骤10，对磁珠进行二次吸附，以提高分选纯度；

单孔磁力架吸附（3 min）

联排磁力架吸附（5 min）

12

倾斜磁力架，将样品倒入新的收集管中，收集样品；

Note：分选的细胞可采用400 g离心7 min，用于后续培养和分析。

细胞分选成功

Note：1. 0.1-1×108 cells（0.1-1 mL）推荐使用5 mL单孔磁极（Starter EasyIso Separator）吸附总体积为2.5 mL；

2-5×108 cells（2-5 mL）推荐使用15 mL联排磁极（Starter EasyEights EasyIso Separator）吸附总体积为7.5 mL；

2. 若样本活率偏低，建议使用去死细胞试剂盒去除死细胞（Dead Cell Removal Set, (RUO)#S0K0009）；


Picture

Validation Data

从人外周血单个核细胞（PBMCs）中富集Human Naïve CD8 T细胞，分选后细胞使用CD8-Pacific Blue (Clone: S-R533)、CD45RO-PE-Cy7 (Clone: UCHL1)、CD45RA-APC (Clone: HI100)、CCR7(CD197)-FITC (Clone: S-R704)荧光抗体进行染色，以活细胞（Live⁺）设门进行分析，检测分选组分中Naïve CD8 T细胞的比例。流式细胞术检测结果表明，本次分选后CD8⁺CD45RO⁻细胞纯度为93.5%，CD8⁺CD45RO⁻细胞中CD45RA⁺CCR7⁺细胞纯度为99.1%。