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Human Naïve CD4 T Cell Isolation Kit (Column-Free)

Human Naïve CD4 T Cell Isolation Kit (Column-Free)

Catalog Number: S0K3014 Reactivity: Human Conjugation: Brand: Starter
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$1,000 USD
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Product Details

Product Specification


Reactivity Human
Stability & Storage

避光保存于 2–8 ℃，不可冻存。

Background

Human Naïve CD4 T细胞的免疫表型为CD3⁺CD4⁺CD45RA⁺CD45RO⁻，是人体适应性免疫系统中负责初始抗原识别与定向分化的核心辅助T细胞前体群体，也是维持免疫稳态、介导特异性应答及形成免疫记忆的关键细胞亚群。Human Naïve CD4 T细胞阴选试剂盒基于免疫磁珠阴性分选技术研发，摒弃阳性分选的抗体结合标记缺陷，通过特异性去除非目标细胞（如CD8 T细胞、NK细胞、B细胞、单核细胞、树突状细胞、粒细胞及记忆性T细胞等），获得无标记、原生状态的高纯度Naïve CD4 T细胞，完美保留细胞初始静息状态、表面分子完整性与多向分化潜能，适配体外活化增殖、亚群定向分化诱导、细胞因子分泌检测等各类功能实验，成为目前人Naïve CD4 T细胞分离的主流科研工具。

Protocol

步骤

操作说明

剂量和时间

1

从外周血通过淋巴细胞分离液密度梯度离心，分离PBMC或直接复苏冻存的PBMC细胞，进行细胞计数；

Note: 推荐细胞采用AO/PI染色后进行计数；PBMC可以采用400 g离心7 min；

制备样本

2

用100 μL MagSep Separation Buffer重悬1×107细胞；

Note: 试剂根据样品体积等比例调整；留分选前样本检测Human Naïve CD4 T细胞比例；

1×107 cells/100 μL

3

加入10 μL Human Naïve CD4 T Cell Biotin Antibody Cocktail至样品中，轻轻混匀。

Note: 本步骤混匀可采用移液器轻轻吹匀2-3下；

10 μL /100 μL

4

Cocktail中的抗体和细胞进行孵育，室温孵育10 min；

室温孵育10 min

5

震荡5-30 s，混匀Streptavidin beads；

混匀5-30 s

6

加15 μL Streptavidin beads至样品中；

15 μL/100 μL

7

轻柔混匀磁珠和细胞，室温孵育8 min；

Note: 本步骤混匀可以采用移液器轻轻吹匀2-3 下；

本步骤中磁珠会出现沉底的情况，可以在2.5 min时，再次混匀一下；

室温孵育8 min

8

加MagSep Separation Buffer到样品中，立即放置在磁极上，防止磁珠大量沉底；

总体积加至2.5 mL（5 mL流式管）

总体积加至7.5 mL（15 mL离心管）

9

样品置于磁极上，使磁珠吸附在管壁上；

单孔磁力架吸附（3 min）

联排磁力架吸附（5 min）

10

倾斜磁力架，将样品倒入新的收集管中，收集样品；

Note: 分选的细胞可采用400 g离心7 min，用于后续培养和分析。

细胞分选成功

Note: 1. 0.1-1 × 108 cells（0.1-1 mL）推荐使用5 mL单孔磁极(Starter EasyIso Separator)吸附总体积为2.5 mL；

2-5 ×108 cells（2-5 mL）推荐使用15 mL联排磁极(Starter EasyEights EasyIso Separator)吸附总体积为7.5 mL；

2. 若样本活率偏低，建议使用去死细胞试剂盒去除死细胞（Dead Cell Removal Set, (RUO)#S0K0009）；


Picture

Validation Data

采用Human Naïve CD4 T Cell无柱式分选试剂盒，从人外周血单个核细胞（PBMCs）中富集Naïve CD4 T细胞。分选后细胞使用CD3-FITC(Clone: UCHT1)、CD4-Alexa Fluor® 647 (Clone: OKT4)、CD45RA-PE-Cy7 (Clone: HI100)、CD45RO-Pacific Blue (Clone: UCHL1)荧光抗体进行染色，以活细胞（Live⁺）设门进行分析, 检测分选组分中Naïve CD4 T细胞的比例。流式细胞术检测结果表明，本次分选后CD3⁺CD4⁺细胞中CD45RA⁺CD45RO⁻细胞纯度为92.5%。