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Human B Cell Isolation Kit (Column-Free)

Human B Cell Isolation Kit (Column-Free)

Catalog Number: S0K3013 Reactivity: Human Conjugation: Brand: Starter
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$920 USD
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Product Details

Product Specification


Reactivity Human
Stability & Storage

避光保存于 2–8 ℃，不可冻存。

Background

Human B淋巴细胞是适应性体液免疫应答的核心执行者，承担抗原识别、加工提呈、抗体分泌及免疫记忆维持等关键职能，在抵御胞外病原体感染及调控免疫应答强度中发挥不可替代的作用。CD19分子是B细胞表面最具代表性的谱系特异性标志物，属于免疫球蛋白超家族成员，从早期前B细胞至成熟浆细胞阶段均有稳定表达，与B细胞受体协同调节B细胞活化、增殖与分化，是B细胞发育及功能维持的重要调控分子，因此被广泛用作Human B细胞的特异性表面抗原。在免疫学研究中，获取高纯度、高活性且表面分子天然未受扰动的B细胞是保障实验结果可靠性的重要前提。本阴选试剂盒基于阴性分选原理，使用生物素标记的抗体组合特异性标记非B细胞，所识别靶标涵盖T细胞、NK细胞、单核细胞、巨噬细胞、血小板及红系细胞等多种干扰性群体，通过链霉亲和素纳米磁珠高效去除非目标细胞。整个分选过程不与B细胞表面任何抗原结合，可最大程度保留细胞原始形态、表面标志物完整性及生物学功能活性，为下游基因表达分析、体外培养增殖及功能鉴定等实验提供优质细胞材料。

Protocol

步骤

操作说明

剂量和时间

1

从外周血通过淋巴细胞分离液密度梯度离心，分离PBMC或直接复苏冻存的PBMC细胞，进行细胞计数；

Note: 推荐细胞采用AO/PI染色后进行计数；PBMC可以采用400 g离心7 min；

制备样本

2

用100 μL MagSep Separation Buffer重悬1×107细胞；

Note: 试剂根据样品体积等比例调整；留分选前样本检测Human B细胞比例；

1×107 cells/100 μL

3

加入10 μL Human B cell Biotin Antibody Cocktail至样品中，轻轻混匀。

Note: 本步骤混匀可采用移液器轻轻吹匀2-3下；

10 μL/100 μL

4

Cocktail中的抗体和细胞进行孵育，室温孵育10 min；

室温孵育10 min

5

震荡5-30 s混匀Streptavidin beads；

震荡5-30 s

6

加10 μL Streptavidin beads至样品中；

10 μL/100 μL

7

轻柔混匀磁珠和细胞，室温孵育5 min；

Note: 本步骤混匀可以采用移液器轻轻吹匀2-3 下；

本步骤中磁珠会出现沉底的情况，可以在2.5 min时，再次混匀一下；

室温孵育5 min

8

加MagSep Separation Buffer到样品中，立即放置在磁极上，防止磁珠大量沉底；

总体积加至2.5 mL（5 mL流式管）

总体积加至7.5 mL（15 mL离心管）

9

样品置于磁极上，使磁珠吸附在管壁上；

单孔磁力架吸附（3 min）

联排磁力架吸附（5 min）

10

倾斜磁力架，将样品倒入新的收集管中，收集样品；

Note: 分选的细胞可采用400 g离心7 min，用于后续培养和分析。

细胞分选成功

Note: 0.1-1 × 10^8 cells（0.1-1mL）推荐使用5 mL单孔磁极(Starter EasyIso Separator)吸附总体积为2.5mL；

2-5 × 10^8 cells（2-5mL）推荐使用15 mL联排磁极(Starter EasyEights EasyIso Separator)吸附总体积为7.5mL；


Picture

Validation Data

从人外周血单个核细胞（PBMCs）中富集Human B细胞，分选后细胞使用CD19-APC(Clone: HIB19)、CD3-FITC(Clone: UCHT1)荧光抗体进行染色，以活细胞（Live+）设门进行分析, 检测分选组分中B细胞的比例；流式细胞术检测结果表明，本次分选后B细胞纯度为97%。