Unione® TR-FRET Human TSLP/TSLPR Binding Kit

Catalog Number: UA086125 Brand: UA BIOSCIENCE

Price:

$2,180 USD

Size: 500T 100T 2500T 10000T

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Product Details

Product Specification

Host	Human
Stability & Storage	-80℃

Background

【背景介绍】

试剂盒采用均相时间分辨荧光技术（TR-FRET），用于测定 TSLP与 TSLPR之间的相互作用。该方法可以实现简单快速的高通量鉴定抑制剂和抗体阻断剂。

如图所示，TSLP与 TSLPR之间的相互作用是通过使用 Eu 标记的抗 Tag1 抗体（TR-FRET 供体）和 Ac 标记的抗 Tag2 抗体（TR-FRET受体）检测的。由于TSLP与 TSLPR结合介导供体抗体与受体抗体接近，供体抗体的激发会触发向受体抗体的荧光共振能量转移（FRET），使受体抗体特异性发射665nm波长的信号。Bosakitug阳性药可阻断TSLP与 TSLPR的结合，使FRET信号无法产生，所筛选药物对 TSLP与 TSLPR阻断效果越强，信号越低。该特定信号与TSLP与 TSLPR 相互作用的程度成正比。该均相实验操作简单，无需洗涤步骤。

Components

【产品组分及储存条件】

组分	浓度	100T	500T	2500T	10000T	储存温度
Tag1-TSLPR protein	100×	5μL	20μL	100μL	400μL	-80℃
Tag2-TSLP protein	100×	5μL	20μL	100μL	400μL	-80℃
Anti-Tag1 Eu antibody	100×	5μL	25μL	125μL	500μL	-80℃
Anti-Tag2 Ac antibody	25×	20μL	100μL	500μL	2000μL	-80℃
Detection buffer	10×	400μL	2mL	10mL	40mL	-80℃

注意：所有首次解冻后立即分装，并按建议储存温度保存，避免稀释后储存及反复冻融。

Protocol

【实验流程及操作】

1、试剂准备

1.1 使用前将所有试剂室温融化（室温平衡至少30min）。384浅孔板反应体系为20μL（反应体系试剂用量如表所示），在配制之前计算实验所需体积，按需配制；以下配制仅供参考，以500次为例。

表1. 试剂配制

试剂名称	配置	每个检测孔用量μL
Detection buffer	取2mL 10 × Detection buffer加入18mL去离子水，稀释至1×，混匀备用。	-
Tag1-TSLPR protein	取20μL Tag1-TSLPR protein原液，1× Detection buffer稀释至2mL ,混匀备用。	4
Tag2-TSLP protein	取20μL Tag2-TSLP protein原液，1×Detection buffer稀释至2mL ,混匀备用。	4
Mix	取25μL Anti-Tag1 Eu antibody 原液，加入 1×Detection buffer 2.475mL, 混匀备用; 取100μL Anti-Tag2 Ac antibody 原液，加入 1× Detection buffer 2.4mL, 混匀备用; Anti-Tag1 Eu antibody和Anti-Tag2 Ac antibody分别稀释后1:1混匀备用。	10

1.2 待测样品梯度稀释

以Bosakitug为例，稀释液为1× Detection buffer，为降低基质效应干扰的影响，推荐使用与待测样品基质相同的溶液稀释；且待测样本根据实际浓度调整。

表2. 阳性药Bosakitug梯度稀释（根据实际情况调整）

	Bosakitug终浓度nM	Bosakitug配置浓度nM	配置方法
①	10.00	100.00	3μL 2μM Bosakitug+57μL 1× Detection buffer
②	5.00	50.00	30μL ① +30μL 1× Detection buffer
③	2.50	25.00	30μL ② +30μL 1× Detection buffer
④	1.25	12.50	30μL ③ +30μL 1× Detection buffer
⑤	0.63	6.25	30μL ④ +30μL 1× Detection buffer
⑥	0.31	3.13	30μL ⑤ +30μL 1× Detection buffer
⑦	0.16	1.56	30μL ⑥ +30μL 1× Detection buffer
⑧	0.08	0.78	30μL ⑦ +30μL 1× Detection buffer
⑨	0.04	0.39	30μL ⑧ +30μL 1× Detection buffer
Blank	0	0	30μL 1× Detection buffer

2、加样及对照

2.1 实验孔加样顺序：2μL测待样品，4μL Tag2-TSLP protein工作液，4μL Tag1- TSLPR protein工作液，10μL混匀的Mix，依次加入384浅孔板中；

2.2 最大值对照： 2μL 1× Detection buffer稀释液，4μL Tag2-TSLP protein工作液，4μL Tag1- TSLPR protein工作液，10μL混匀的Mix，依次加入384浅孔板中；

2.3 质控孔(NC)：10μL 1×Detection buffer加10μL Mix。

所有样本加完后，离心，盖封板膜，室温孵育1小时。

	最大值对照	样本	NC
第一步	2μL 1× Detection Buffer	2μL 梯度稀释待测样本	10uL 1× Detection Buffer
	4μL Tag2-TSLP protein工作液
	孵育10min
第二步	4μL Tag1-TSLPR protein工作液
	10μL Mix
第三步	盖封板膜，室温孵育1h

3、检测

在兼容TR-FRET的酶标仪上检测。激发光为320/340nm，检测620nm和665nm的发射波长。

【结果计算】

1) 计算信号值（Ratio）：665nm荧光信号比620nm荧光信号再乘10000。

Ratio = (665/620) ×10000

2) 根据信号值计算Net signal：

Net signal = (Std-NC)/NC×100

3) 计算CV（%）：

CV（%）= Standard Deviation/Mean Ratio × 100%

【数据示例】

以下数据不能代替实验中获得的数据，只作为示例，结果可能因读板仪器而异。

注：推荐微孔板（384孔板，白色，浅孔）

Country/region

Unione® TR-FRET Human TSLP/TSLPR Binding Kit