{"product_id":"unione-tr-fret-thunder-kinactive-tk-general-kit-ua086158","title":"UniOne® TR-FRET KinActive-TK general Kit","description":"\u003ch4\u003eProduct Specification\u003c\/h4\u003e\u003cdiv class=\"responsive-table product-detail-table details-table\"\u003e\n\u003cbr\u003e\u003ctable style=\"width: 100%; height: auto;\"\u003e\u003ctbody\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"width: 22%;\"\u003e\u003cstrong\u003eHost\u003c\/strong\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"width: 78%;\"\u003eHuman\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"width: 22%;\"\u003e\u003cstrong\u003eStability \u0026amp; Storage\u003c\/strong\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"width: 78%;\"\u003e\u003cp\u003e\u003cspan\u003e-80℃\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003c\/tbody\u003e\u003c\/table\u003e\n\u003c\/div\u003e\u003ch4\u003eBackground\u003c\/h4\u003e\u003cdiv\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003eUniOne® TR-FRET THUNDER™ KinActive-TK general Kit\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e是一种采用均相时间分辨荧光技术（TR-FRET）测定酪氨酸激酶活性的通用方法，适用于多种酪氨酸激酶的活性检测及抑制剂筛选，该方法操作简单。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e \u003cspan\u003e如下图所示，检测方法包括酶促反应和检测两个步骤。在酶促反应过程中，体系成分包括激酶、生物素化底物以及ATP，加入ATP后，激酶将生物素化的TK底物磷酸化。在检测步骤中，用检测缓冲液稀释检测试剂，缓冲液中的EDTA将酶促反应终止，Eu标记抗体的抗体和链霉亲和素-BAc同时捕获被磷酸化的底物，结合在底物上的两种检测试剂产生的TR-FRET信号与底物磷酸化水平成正比，即与体系中激酶的磷酸化活性成正比。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cimg src=\"https:\/\/univ-pmc.oss-cn-shanghai.aliyuncs.com\/cf778e7f-c82c-4afc-b42e-2edd8a7eab7d.png\" style=\"margin-left:30px; width:596px; height:auto; vertical-align:middle;\" alt=\"\"\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/div\u003e\u003ch4\u003eComponents\u003c\/h4\u003e\u003cdiv\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold;color:#1655A5\"\u003e【产品组分及储存条件】\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003ctable border=\"1\" style=\"border-collapse:collapse;width:auto;border:1px solid #000000\"\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd 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solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e5\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e×\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e0.4mL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e2mL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e10\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003emL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e40\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003emL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid 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style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e2mL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e10mL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e50\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003emL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e20\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e0mL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003c\/table\u003e\n\u003cbr\u003e\u003cp\u003e\u003cspan\u003e注意：产品主要包括生物素化底物、检测试剂及缓冲液。缓冲液可保存在4℃，其他组分保存在-80℃。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold;color:#1655A5\"\u003e添加成分（未提供）\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e试剂盒组分未包含\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eEGFR\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e激酶，酶促缓冲液用ddH\u003c\/span\u003e\u003csub\u003e\u003cspan\u003e2\u003c\/span\u003e\u003c\/sub\u003e\u003cspan\u003eO稀释至1×后，添加DTT, MgCl\u003c\/span\u003e\u003csub\u003e\u003cspan\u003e2\u003c\/span\u003e\u003c\/sub\u003e\u003cspan\u003e, MnCl\u003c\/span\u003e\u003csub\u003e\u003cspan\u003e2\u003c\/span\u003e\u003c\/sub\u003e\u003cspan\u003e配置成激酶缓冲液，推荐添加浓度1mM DTT, 5mM MgCl\u003c\/span\u003e\u003csub\u003e\u003cspan\u003e2\u003c\/span\u003e\u003c\/sub\u003e\u003cspan\u003e, 5mM MnCl\u003c\/span\u003e\u003csub\u003e\u003cspan\u003e2\u003c\/span\u003e\u003c\/sub\u003e\u003cspan\u003e。试剂盒未包含ATP，ATP的使用浓度需提前梯度稀释确定最佳使用浓度。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/div\u003e\u003ch4\u003eProtocol\u003c\/h4\u003e\u003cdiv\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003e1、试剂准备\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e1.1 使用前将所有试剂室温融化（室温平衡至少30min）。384浅孔板反应体系为20\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eμ\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eL（反应体系试剂用量如表所示），在配制之前计算实验所需体积，按需配制；以下配制仅供参考，以500次为例。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e在酶促反应步骤中，各种试剂用配置的1×\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e Enzymatic Buffer\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e配置，检测试剂用提供的\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e1\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e×\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e Detection Buffer\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e配置。各种组分工作液配置后不建议保存，必须立即使用，为了避免降解，激酶工作液在实验过程中应保存在冰上。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003ctable border=\"1\" style=\"border-collapse:collapse;width:auto;border:1px solid #000000\"\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e组分\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e配置方法\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e1×\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e Enzymatic Buffer\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:justify\"\u003e\u003cspan\u003e用ddH\u003c\/span\u003e\u003csub\u003e\u003cspan\u003e2\u003c\/span\u003e\u003c\/sub\u003e\u003cspan\u003eO将\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e5\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e×\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e Enzymatic Buffer\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e稀释至1×，添加\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold;color:#000000\"\u003esupplement component\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e(使用浓度需提前梯度稀释，确定最佳使用浓度)，DTT，MgCl\u003c\/span\u003e\u003csub\u003e\u003cspan\u003e2\u003c\/span\u003e\u003c\/sub\u003e\u003cspan\u003e, MnCl\u003c\/span\u003e\u003csub\u003e\u003cspan\u003e2\u003c\/span\u003e\u003c\/sub\u003e\u003cspan\u003e配置成1× \u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eEnzymatic Buffer\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e1\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e×\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e Detection Buffer\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp\u003e\u003cspan\u003e1\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e×\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e Detection Buffer\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e抑制剂\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:justify\"\u003e\u003cspan\u003e用1×\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e Enzymatic Buffer\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e稀释化合物，稀释为酶促反应步骤(10 μL)所需终浓度的2.5倍的工作溶液。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003eTK Substrate\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:justify\"\u003e\u003cspan\u003e用1×\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e Enzymatic Buffer\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e稀释TK Substrate原液，配置\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003e5×\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eTK Substrate\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003e工作液，\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e该工作液浓度为酶促反应步骤所需 TK Substrate 终浓度的 5 倍。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003eATP\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:justify\"\u003e\u003cspan\u003e用1× Enzymatic Buffer稀释ATP原液，配制\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003e5×ATP 工作液\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e；该工作液浓度为酶促反应步骤所需 ATP 终浓度的 5 倍。（ATP使用浓度需提前梯度稀释，确定最佳使用浓度）\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003eSA-BAc\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp\u003e\u003cspan\u003e用\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e1\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e×\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e Detection Buffer\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e按照稀释倍数稀释至1×即为工作液。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003eB\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eTK-Antibody-Eu\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp\u003e\u003cspan\u003e用\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e1\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e×\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e Detection Buffer\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e按照稀释倍数稀释至1×即为工作液。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003c\/table\u003e\n\u003cbr\u003e\u003cp\u003e\u003cspan\u003e1.2 \u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e待测样品\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e（抑制剂）梯度稀释\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e用1× Enzymatic Buffer稀释化合物，根据抑制剂的一致效果确定稀释倍数和稀释梯度。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cimg src=\"https:\/\/univ-pmc.oss-cn-shanghai.aliyuncs.com\/de95a604-cc84-4176-a8f9-162f8c8d585b.png\" style=\"margin-left:30px; width:546px; height:auto; vertical-align:middle;\" alt=\"\"\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003e2.反应体系\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e如图所示，以384浅孔板为例，添加抑制剂、底物、激酶和ATP后在室温或37℃（酶促反应孵育温度时间需根据目标激酶优化）孵育30分钟（酶促反应体系中，建议DMSO浓度不高于2%），反应后加入检测试剂，检测缓冲液中的EDTA将酶促反应终止，室温孵育1h后上机读值。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e实验应包括以下对照孔：\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e \u003cspan\u003e（1）阴性对照：非特异性信号，用于计算反应体系的特异性信号值。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e \u003cspan\u003e（2）缓冲液对照：排除缓冲液对信号值的影响。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003ctable border=\"1\" style=\"border-collapse:collapse;width:auto;border:1px solid #000000\"\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003e酶促反应\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd colspan=\"3\" style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003e对照\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003e组分\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003e实验孔\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003e阴性对照\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003eEu标记抗体\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003e缓冲液\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e抑制剂\/激酶缓冲液\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e4μL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e4μL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e 1×\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e Enzymatic Buffer\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd rowspan=\"4\" style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e10μL\u003c\/span\u003e\u003cbr\u003e\u003cspan\u003e1×\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e Enzymatic Buffer\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd rowspan=\"4\" style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e10μL\u003c\/span\u003e\u003cbr\u003e\u003cspan\u003e1×\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e Enzymatic Buffer\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd rowspan=\"4\" style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan style=\"margin-right: 8px;\"\u003e1.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e酶促反应\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e(10μL)室温或37℃孵育30min。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003eTK\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e2μL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e2μL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003eTK Substrate\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e2μL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e2μL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e 1×\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e Enzymatic Buffer\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003eATP\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e2μL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e2μL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003eSA-BAc\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e5μL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e5μL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\n\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e5μL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e  \u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e1\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e×\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e Detection Buffer\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd rowspan=\"2\" style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e10μL\u003c\/span\u003e\u003cbr\u003e\u003cspan\u003e1\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e×\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e Detection Buffer\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd rowspan=\"2\" style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan style=\"margin-right: 8px;\"\u003e2.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e检测步骤\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e室温孵育1\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eh\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003eEu标记抗体\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e5μL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e5μL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e5μL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003c\/table\u003e\n\u003cbr\u003e\u003cp\u003e\u003cspan style=\"margin-right: 8px;\"\u003e（3）\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eEu标记抗体对照：用于验证Eu标记抗体在620nM的正常信号值。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold;color:#1655A5\"\u003e【检测】\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e在兼容的TR-FRET酶标仪上检测（激发光为320nm，检测620nm和665nm的发射波长）。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold;color:#1655A5\"\u003e【结果计算】\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e1)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e \u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eRatio\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e：\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:left\"\u003e\u003cspan\u003eRatio\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e \u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e=\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e \u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e(665\/620)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e ×\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e10000\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e2)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e \u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eNet signal\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e： \u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:left\"\u003e\u003cspan\u003eNet signal\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e = (Std-\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eNC\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e)\/\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eNC\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e×100\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003eStd：the ratio of sample and control\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003eNC: the ratio of \u003c\/span\u003e\u003cspan\u003enegative\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e \u003c\/span\u003e\u003cspan\u003econtrol\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e3)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e CV（%）\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e：\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:left\"\u003e\u003cspan\u003eCV（%）= Standard Deviation\/Mean Ratio × 100%\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003e注：推荐\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003e微孔板（384孔板，白色，浅孔）\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003e，货号：abs7311；\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold;color:#1655A5\"\u003e【\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold;color:#1655A5\"\u003e激酶实验优化\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold;color:#1655A5\"\u003e】\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:left\"\u003e\u003cspan style=\"margin-right: 8px;\"\u003e1)\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold;color:#000000\"\u003esupplement component\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold;color:#000000\"\u003e浓度优化\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e某些酪氨酸激酶可能需要在激酶缓冲液1X中添加\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold;color:#000000\"\u003esupplement component\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e试剂，以获得最佳酶活性。此步骤可确定最佳\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold;color:#000000\"\u003esupplement component\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e浓度——即使信号达到最大值80%时对应的浓度。制备一系列不同浓度\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold;color:#000000\"\u003esupplement component\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e的激酶缓冲液1X（建议范围从125 nM至0 nM）。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:left\"\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cimg src=\"https:\/\/univ-pmc.oss-cn-shanghai.aliyuncs.com\/137a00fe-ba39-493b-bbdc-8daa1d45ada1.png\" style=\"margin-left:30px; width:334px; height:auto; vertical-align:middle;\" alt=\"\"\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:left\"\u003e\u003cspan style=\"margin-right: 8px;\"\u003e2)\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e激酶浓度优化\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e本步骤主要为了确定最佳酶浓度（此时信号达到最大值的80%）。可在高检测信号与酶消耗之间寻求折衷方案。应使用固定浓度的TK-底物-生物素（如：1 µM）和ATP（如：100 µM），将酶进行梯度稀释并测试（建议酶浓度为10、2、1、0 ng\/well，也可根据前期数据进行灵活调整）。让酶促反应进行30分钟。生物素\/链霉亲和素比例建议为8:1。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:left\"\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cimg src=\"https:\/\/univ-pmc.oss-cn-shanghai.aliyuncs.com\/a85ee1f0-ef0a-401f-9e39-50abd24c115c.png\" style=\"margin-left:30px; width:251px; height:auto; vertical-align:middle;\" alt=\"\"\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e3）\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e动力学研究\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e酶动力学特性取决于激酶与底物的浓度。孵育时间研究需使用固定浓度的激酶（根据前次实验测定）、ATP（100 μM）及底物（1 µM）进行；通过在不同时间点加入检测试剂（1、2、5、10、30、60分钟），使反应在相应时间点终止。生物素与链霉亲和素的比例建议为8：1。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e4）\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e底物浓度优化\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e采用最佳酶浓度及饱和ATP浓度（100 µM）。建议测试不同TK底物-生物素浓度范围，其浓度梯度可从2 µM至1nM（两倍系列稀释）。激酶反应应在先前确定的最佳孵育时间点终止。在检测步骤中，需根据TK底物-生物素的浓度调整链霉亲和素的浓度，以确保生物素\/链霉亲和素的比例始终维持在8:1，由于背景信号可能会随着链霉亲和素浓度的升高而升高，因此对每种\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e链霉亲和素\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e均需设置阴性对照。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e5）\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eATP 浓度优化 \u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e本步骤优化ATP的使用浓度，需采用最佳酶浓度及饱和的TK底物浓度（1 µM）。建议测试ATP浓度范围为300 µM至1.7 nM（3倍梯度稀释）。在最佳孵育时间点，通过加入检测试剂终止激酶反应。生物素与链霉亲和素的比例建议为8：1。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e6）\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eBiotin\/streptavidin 比率优化\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e优化生物素\/链霉亲和素的比例是关键步骤，该步骤可显著增强信号强度。制备不同生物素\/链霉亲和素比例（2\/1、4\/1、8\/1）的链霉亲和素溶液；实验中采用最佳酶浓度、ATP浓度及底物浓度进行检测；同时，每种链霉亲和素浓度均需设置相应的阴性对照，因为该试剂会直接对背景值产生影响。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e7）\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eIC50 测定\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e需在广泛的抑制剂浓度范围内测试激酶活性，以绘制剂量反应曲线；该测试通常采用先前已确定的最佳检测条件进行。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/div\u003e","brand":"UA 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