{"product_id":"unione-tr-fret-thunder-kinactive-btk-kit-ua086160","title":"UniOne® TR-FRET KinActive-BTK Kit","description":"\u003ch4\u003eProduct Specification\u003c\/h4\u003e\u003cdiv class=\"responsive-table product-detail-table details-table\"\u003e\n\u003cbr\u003e\u003ctable style=\"width: 100%; height: auto;\"\u003e\u003ctbody\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"width: 22%;\"\u003e\u003cstrong\u003eHost\u003c\/strong\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"width: 78%;\"\u003eHuman\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"width: 22%;\"\u003e\u003cstrong\u003eStability \u0026amp; Storage\u003c\/strong\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"width: 78%;\"\u003e\u003cp\u003e\u003cspan\u003e-80℃\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003c\/tbody\u003e\u003c\/table\u003e\n\u003c\/div\u003e\u003ch4\u003eBackground\u003c\/h4\u003e\u003cdiv\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003eTR-FRET KinActive-BTK Kit是一种采用均相时间分辨荧光技术（TR-FRET）测定\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e布鲁顿氏酪氨酸激酶（BTK激酶）\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e活性的方法，适用于BTK激酶的活性检测及抑制剂筛选，该方法操作简单。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e \u003cspan\u003e如下图所示，检测方法包括酶促反应和检测两个步骤。在酶促反应过程中，体系成分包括激酶、生物素化底物以及ATP，加入ATP后，激酶将生物素化的BTK底物磷酸化。在检测步骤中，用检测缓冲液稀释检测试剂，缓冲液中的EDTA将酶促反应终止，Eu标记抗体的抗体和链霉亲和素-BAc同时捕获被磷酸化的底物，结合在底物上的两种检测试剂产生的TR-FRET信号与底物磷酸化水平成正比，即与体系中激酶的磷酸化活性成正比。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cimg src=\"https:\/\/univ-pmc.oss-cn-shanghai.aliyuncs.com\/2379c3cb-d535-4676-9886-b9003cb912d2.png\" style=\"margin-left:30px; width:596px; height:auto; vertical-align:middle;\" alt=\"\"\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/div\u003e\u003ch4\u003eComponents\u003c\/h4\u003e\u003cdiv\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold;color:#1655A5\"\u003e【产品组分及储存条件】\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003ctable border=\"1\" style=\"border-collapse:collapse;width:auto;border:1px solid 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solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e2m\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold;color:#000000\"\u003esupplement component\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e400nM\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e20μL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e100μL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e500\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eμL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e2m\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e5\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e×\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e Enzymatic Buffer\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e5\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e×\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e0.4mL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd 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#000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e40\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003emL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e1\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e×\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e Detection Buffer\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e1\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e×\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e2mL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e10mL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e50\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003emL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e20\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e0mL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003c\/table\u003e\n\u003cbr\u003e\u003cp\u003e\u003cspan\u003e注意：产品主要包括生物素化底物、检测试剂及缓冲液。缓冲液可保存在4℃，其他组分保存在-80℃。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold;color:#1655A5\"\u003e添加成分（未提供）\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e试剂盒组分未包含酶促缓冲液用ddH\u003c\/span\u003e\u003csub\u003e\u003cspan\u003e2\u003c\/span\u003e\u003c\/sub\u003e\u003cspan\u003eO稀释至1×后，添加DTT, MgCl\u003c\/span\u003e\u003csub\u003e\u003cspan\u003e2\u003c\/span\u003e\u003c\/sub\u003e\u003cspan\u003e, MnCl\u003c\/span\u003e\u003csub\u003e\u003cspan\u003e2\u003c\/span\u003e\u003c\/sub\u003e\u003cspan\u003e配置成激酶缓冲液，推荐添加浓度1mM DTT, 5mM MgCl\u003c\/span\u003e\u003csub\u003e\u003cspan\u003e2\u003c\/span\u003e\u003c\/sub\u003e\u003cspan\u003e, 5mM MnCl\u003c\/span\u003e\u003csub\u003e\u003cspan\u003e2\u003c\/span\u003e\u003c\/sub\u003e\u003cspan\u003e。试剂盒未包含ATP，ATP的使用浓度需提前梯度稀释确定最佳使用浓度。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/div\u003e\u003ch4\u003eProtocol\u003c\/h4\u003e\u003cdiv\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold;color:#1655A5\"\u003e【实验流程及操作】\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003e1、试剂准备\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e1.1 使用前将所有试剂室温融化（室温平衡至少30min）。384浅孔板反应体系为20\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eμ\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eL（反应体系试剂用量如表所示），在配制之前计算实验所需体积，按需配制；以下配制仅供参考，以500次为例。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:justify\"\u003e\u003cspan\u003e在酶促反应步骤中，各种试剂用配置的1×\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e Enzymatic Buffer\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e配置，检测试剂用提供的\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e1\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e×\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e Detection Buffer\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e配置。各种组分工作液配置后不建议保存，必须立即使用，为了避免降解，激酶工作液在实验过程中应保存在冰上。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003ctable border=\"1\" style=\"border-collapse:collapse;width:auto;border:1px solid #000000\"\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e组分\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e配置方法\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e1×\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e Enzymatic Buffer\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:justify\"\u003e\u003cspan\u003e用ddH2O将\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e5\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e×\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eEnzymatic Buffer\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e稀释至1×，\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e添\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e加\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold;color:#000000\"\u003esupplement component\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold;color:#000000\"\u003e \u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e(终浓度4 nM) ，DTT，MgCl\u003c\/span\u003e\u003csub\u003e\u003cspan\u003e2\u003c\/span\u003e\u003c\/sub\u003e\u003cspan\u003e, MnCl\u003c\/span\u003e\u003csub\u003e\u003cspan\u003e2\u003c\/span\u003e\u003c\/sub\u003e\u003cspan\u003e配置成1× 激酶缓冲液。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e1\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e×\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e Detection Buffer\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp\u003e\u003cspan\u003e1\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e×\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e Detection Buffer\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e抑制剂\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:justify\"\u003e\u003cspan\u003e用1×\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e Enzymatic Buffer\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e稀释化合物，稀释为酶促步骤(10 μL)所需终浓度的2.5倍的工作溶液。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003eBTK激酶\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp\u003e\u003cspan\u003e用1×\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e Enzymatic Buffer\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e稀释,配置浓度为5μM的工作液。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003eBTK Substrate\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:justify\"\u003e\u003cspan\u003e用1×\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e Enzymatic Buffer\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e稀释BTK Substrate原液，配置\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003e5×B\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eTK Substrate\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003e工作液，\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e该工作液浓度为酶促反应步骤所需 BTK Substrate 终浓度的 5 倍。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003eATP\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:justify\"\u003e\u003cspan\u003e用1× Enzymatic Buffer稀释ATP原液，配制\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003e5×ATP 工作液\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e；该工作液浓度为酶促反应步骤所需 ATP 终浓度的 5 倍。（ATP使用浓度需提前梯度稀释，确定最佳使用浓度）\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003eSA-BAc\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp\u003e\u003cspan\u003e用\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e1\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e×\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e Detection Buffer\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e按照稀释倍数稀释至1×即为工作液。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003eB\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eTK-Antibody-Eu\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp\u003e\u003cspan\u003e用1× Detection Buffer按照稀释倍数稀释至1×即为工作液。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003c\/table\u003e\n\u003cbr\u003e\u003cp\u003e\u003cspan\u003e1.2 \u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e待测样品\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e（抑制剂）梯度稀释\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e用1× Enzymatic Buffer稀释化合物，根据抑制剂的一致效果确定稀释倍数和稀释梯度。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003e2.反应体系\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:left\"\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cimg src=\"https:\/\/univ-pmc.oss-cn-shanghai.aliyuncs.com\/512f7bb0-361e-4507-9d56-030069f9f33e.png\" style=\"margin-left:30px; width:546px; height:auto; vertical-align:middle;\" alt=\"\"\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e如图所示，以384浅孔板为例，添加抑制剂、底物、激酶和ATP后在室温或37℃（酶促反应孵育温度时间需根据目标激酶优化）孵育30分钟（酶促反应体系中，建议DMSO浓度不高于2%），反应后加入检测试剂，检测缓冲液中的EDTA将酶促反应终止，室温孵育1h后上机读值。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e实验应包括以下对照孔：\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e \u003cspan\u003e（1）阴性对照：非特异性信号，用于计算反应体系的特异性信号值。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e \u003cspan\u003e（2）缓冲液对照：排除缓冲液对信号值的影响。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e \u003cspan\u003e（3）Eu标记抗体对照：用于验证Eu标记抗体在620nM的正常信号值。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003ctable border=\"1\" style=\"border-collapse:collapse;width:auto;border:1px solid #000000\"\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003e酶促反应\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd colspan=\"3\" style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003e对照\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003e组分\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003e实验孔\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003e阴性对照\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003eEu标记抗体\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003e缓冲液\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e抑制剂\/激酶缓冲液\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e4μL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e4μL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e 1×\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e Enzymatic Buffer\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd rowspan=\"4\" style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e10μL\u003c\/span\u003e\u003cbr\u003e\u003cspan\u003e1×\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e Enzymatic Buffer\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd rowspan=\"4\" style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e10μL\u003c\/span\u003e\u003cbr\u003e\u003cspan\u003e1×\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e Enzymatic Buffer\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd rowspan=\"4\" style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp\u003e\u003cspan\u003e1.酶促反应(10\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eμ\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eL)室温或37℃孵育30min。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003eBTK\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e2μL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e2μL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003eBTK Substrate\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e2μL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e2μL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e 1×\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e Enzymatic Buffer\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003eATP\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e2μL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e2μL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003eSA-BAc\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e5μL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e5μL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\n\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e5μL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e                \u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e  \u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e1\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e×\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e Detection Buffer\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd rowspan=\"2\" style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e10μL\u003c\/span\u003e\u003cbr\u003e\u003cspan\u003e1\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e×\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e Detection Buffer\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd rowspan=\"2\" style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp\u003e\u003cspan\u003e2.检测步骤(10\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eμ\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eL)室温孵育1h。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003eEu标记抗体\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e5μL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e5μL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e5μL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003c\/table\u003e\n\u003cbr\u003e\u003cp\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold;color:#1655A5\"\u003e【检测】\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e在兼容的TR-FRET酶标仪上检测（激发光为320nm，检测620nm和665nm的发射波长）。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold;color:#1655A5\"\u003e【结果计算】\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e1) 计算信号值（Ratio）：665nm荧光信号比620nm荧光信号再乘10000。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:left\"\u003e\u003cspan\u003eRatio\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e \u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e=\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e \u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e(665\/620)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e ×\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e10000\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e2) 根据信号值计算\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eNet signal\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e： \u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:left\"\u003e\u003cspan\u003eNet signal\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e = (Std-NC)\/NC×100\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e3) 计算CV（%）：\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:left\"\u003e\u003cspan\u003eCV（%）= Standard Deviation\/Mean Ratio × 100%\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold;color:#1655A5\"\u003e【结果\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold;color:#1655A5\"\u003e展示\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold;color:#1655A5\"\u003e】\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e1）激酶活性测试\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e                \u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cimg src=\"https:\/\/univ-pmc.oss-cn-shanghai.aliyuncs.com\/ff53fd04-cb25-40d1-be83-86c566671eeb.png\" style=\"margin-left:30px; width:199px; height:auto; vertical-align:middle;\" alt=\"\"\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cspan\u003e  \u003c\/span\u003e\u003cp\u003e\u003cimg src=\"https:\/\/univ-pmc.oss-cn-shanghai.aliyuncs.com\/32babb6f-753f-4004-97dc-0092cdeb4ec6.png\" style=\"margin-left:30px; width:272px; height:auto; vertical-align:middle;\" alt=\"\"\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003e注：推荐\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003e微孔板（384孔板，白色，浅孔）\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/div\u003e","brand":"UA 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