{"product_id":"ua-glo-gtpase-activity-detection-kit-ua079051","title":"UA-Glo® GTPase Activity Detection Kit","description":"\u003ch4\u003eProduct Specification\u003c\/h4\u003e\u003cdiv class=\"responsive-table product-detail-table details-table\"\u003e\n\u003cbr\u003e\u003ctable style=\"width: 100%; height: auto;\"\u003e\u003ctbody\u003e\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"width: 22%;\"\u003e\u003cstrong\u003eStability \u0026amp; Storage\u003c\/strong\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"width: 78%;\"\u003e\u003cp\u003eDry ice transport. Store protected from light at −20°C or lower; for long-term (\u0026gt;3 months) storage, −80°C is recommended. Refer to the vial label for the expiration date. After first use, it is advisable to aliquot the reagent as needed and store it protected from light at −20°C or below, avoiding repeated freeze-thaw cycles. When aliquoting the ATP assay reagent, exercise caution to prevent ATP contamination.\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\u003c\/tbody\u003e\u003c\/table\u003e\n\u003c\/div\u003e\u003ch4\u003eBackground\u003c\/h4\u003e\u003cdiv\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003eGTPases are GTP-hydrolyzing enzymes and constitute an essential component of many cellular signaling pathways. GTPases exhibit high affinity for both GTP and GDP; upon binding GTP, they adopt an active conformation, whereas hydrolysis of bound GTP to GDP converts them to an inactive state. Through the interconversion between these two conformations, GTPases regulate the activation and deactivation of numerous cellular signaling pathways. This conformational switch is modulated by two classes of proteins: GTPase-activating proteins (GAPs) and guanine nucleotide exchange factors (GEFs). GAPs enhance the GTPase's intrinsic GTP-hydrolyzing activity, thereby shutting down the signaling pathway, while GEFs facilitate the exchange of GDP bound to the inactive GTPase for GTP, restoring GTPase activity and activating the signaling cascade.\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003eThe UA-Glo® GTPase Assay Kit can detect GTPase activity and the effects of its associated GAPs and GEFs on that activity. During the GTPase reaction, GTP is consumed, and any remaining GTP can be converted to ATP by the G2A reagent included in the kit. The final ATP detection reagent contains luciferase, which catalyzes the reaction between ATP and luciferin, producing luminescence. The intensity of this luminescence is directly proportional to the amount of ATP—and thus to the remaining GTP—while being inversely proportional to GTPase activity. The UA-Glo® GTPase Assay Kit is suitable for measuring intrinsic GTPase activity, GAP-stimulated GTPase activity, GAP activity, and GEF activity. This kit offers a high signal-to-noise ratio, excellent reproducibility, and outstanding stability, making it particularly well suited for high-throughput compound screening assays.\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/div\u003e\u003ch4\u003eComponents\u003c\/h4\u003e\u003cdiv\u003e\n\u003cp style=\"text-align:justify\"\u003e\u003cspan\u003eUA-Glo®\u003c\/span\u003e\u003csup\u003e\u003cspan\u003e \u003c\/span\u003e\u003c\/sup\u003e\u003cspan\u003e \u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGTPase\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eThe components and specifications of the test kit are as follows. Number of detectable samples\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e384-\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003ewell plate\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e \u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e(\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003elow volume\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eAccording to the sample being\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGTPase\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003ereaction\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e5 μL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e, add\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eG2A\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003econversion reagent\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e5 μL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eand\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eATP\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003edetection reagent\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e10 μL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eCalculation.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eFor a 96-\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003ewell plate, the number of detectable samples is calculated when each component is\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e25 μL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e,\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e25 μL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eand\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e50 μL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eare used.\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003ctable style=\"border-collapse:collapse;width:auto;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003eSpecifications\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003eComponents and specifications\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003eDetection\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003eNumber of wells in a 96-\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003ewell plate\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003eDetection\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003eNumber of wells in a 384-\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003ewell plate\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd 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style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003eGTPase\/GAP\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eBuffer:\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e5 mL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003eGEF\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003ebuffer:\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e5 mL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003eG2A\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003ebuffer:\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e5 mL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003eG2A\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003ereaction reagent\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e(500x)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e:\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e15\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eμ\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003eADP (10mM)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e:\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e100\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eμ\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003eATP\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003edetection reagent:\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e10 mL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003erGTP (10mM)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e:\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e100\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eμ\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003eDTT (100 mM)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e:\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e100\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eμ\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e200\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e1,000\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid 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style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003eGEF\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eBuffer:\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e50 mL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003eG2A\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eBuffer:\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e50 mL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003eG2A\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eReaction reagent\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e(500x)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e:\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e120\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eμ\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003eADP (10 mM)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e:\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e100\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eμ\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003eATP\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eTest reagent:\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e100 mL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003erGTP (10 mM)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e:\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e100\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eμ\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003eDTT (100 mM)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e:\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e1.25 mL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e2,000\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000;border:1px solid #000000\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan\u003e10,000\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003c\/table\u003e\n\u003cbr\u003e\n\u003c\/div\u003e\u003ch4\u003eProtocol\u003c\/h4\u003e\u003cdiv\u003e\n\u003cp style=\"text-align:left\"\u003e\u003cspan\u003eUA-Glo®\u003c\/span\u003e\u003csup\u003e\u003cspan\u003e \u003c\/span\u003e\u003c\/sup\u003e\u003cspan\u003eGTPase\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eThe detection kit measures the enzymatic activity of\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eATP\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eby detecting the content of\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGTPase\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003ethrough a luciferase reaction. The luciferase reaction has extremely high sensitivity, and parameters such as\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003epH,\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003etemperature, and experimental system setup can significantly affect the reaction. Under most experimental conditions, it is not recommended to directly compare absolute values of samples. It is suggested to set the same reference compound on each experimental plate and normalize the sample detection values using the reference compound and solvent control before data processing and comparison.\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:left\"\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003e1. GTPase\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003eActivity Assay\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:left\"\u003e\u003cspan\u003eThe following explanation uses a\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e384-\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003ewell assay plate as an example to illustrate\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGTPase\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eactivity detection.\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:left\"\u003e\u003cspan style=\"margin-right: 8px;\"\u003e1)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eAccording to experimental needs, set up assays for\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGTPase\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eintrinsic activity,\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGAP\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003estimulated\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGTPase\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eactivity,\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGAP\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eactivity, and\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGEF\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eactivity enzyme reactions; refer to the following\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e3.2\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eand\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e3.3\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eand\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e3.4\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eand\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e3.5\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003esections. The reaction system is\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e10\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eμ\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:left\"\u003e\u003cspan style=\"margin-right: 8px;\"\u003e2)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eTake out\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eG2A\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eBuffer, after complete thawing, equilibrate to room temperature\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e(22\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e℃\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e-25\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e℃\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e, invert thoroughly to mix\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:left\"\u003e\u003cspan style=\"margin-right: 8px;\"\u003e3)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eTake out\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eG2A\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eReaction reagent\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e(500x)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eand\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eADP (10mM)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e, after completely thawing, place on ice\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:left\"\u003e\u003cspan style=\"margin-right: 8px;\"\u003e4)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003ePrepare\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eG2A\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003econversion reagent:\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eAdd per well\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e10\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eμ\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eCalculate the required amount of\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eG2A\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003econversion reagent, for example, to prepare\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e1mL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e:\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e998\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eμ\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eL G2A\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003ebuffer\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e+ 2\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eμ\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eL G2A\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003ereaction reagent\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e(500x) + 0.5\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eμ\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eL ADP (10mM)\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:justify\"\u003e\u003cspan style=\"margin-right: 8px;\"\u003e5)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eTake out the experimental steps\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e1\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eenzyme reaction plate, add per well\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e10\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eμ\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e \u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eG2A\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003econversion reagent, shake the plate to mix, incubate at room temperature\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e0.5hr\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:justify\"\u003e\u003cspan style=\"margin-right: 8px;\"\u003e6)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eTake out\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eATP\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003edetection reagent, after completely thawing, invert thoroughly to mix. Add per well\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e20\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eμ\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003etake the required amount of\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eATP\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eBring the assay reagents to room temperature. The luciferase reaction is sensitive to temperature changes.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eATP\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eTest reagents and enzyme reaction assay plates must be equilibrated to room temperature, and the temperature during the assay must be maintained constant (±\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e1\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e°C)\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:justify\"\u003e\u003cspan style=\"margin-right: 8px;\"\u003e7)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eSteps\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e5\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eAdd to each well of the enzyme reaction assay plate\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eTwenty\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003emu\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eATP\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eTesting reagents, plate shaker\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e1 minute\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e, incubate in the dark\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e10 minutes\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e \u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:left\"\u003e\u003cspan style=\"margin-right: 8px;\"\u003e8)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eRead the luminescence signal on a luminometer or a multifunctional microplate reader. The signal is highly stable and can be\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e2-3 hours\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eInternal reading board\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:left\"\u003e\u003cspan\u003e \u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:left\"\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003e2.\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003e \u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003eGTPase\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003eEnzyme reaction\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:justify\"\u003e\u003cspan\u003eThe following, with\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e384-\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eTaking the Kong experimental board as an example to illustrate\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGTPase\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eExperimental setup for enzyme reactions.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGTPase\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eIn enzyme reactions\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGTP\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eThe final concentration is\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e5\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003emu\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eM\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e, it is recommended to\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGTPase\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eIn enzymatic reactions, use no more than\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e5\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003emu\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eM\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eof\/'s\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGTP\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e. Inspection\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGTPase\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eIt can be used when intrinsic activity is present.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e1\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003emu\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eM GTP\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e. Best\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGTP\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eThe concentration may need to be adjusted based on the specific circumstances.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGTPase\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eEnzyme reaction optimization. The reagent kit's\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGTPase\/GAP\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eBuffer and\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGlobal Environment Facility\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eThe buffer is suitable for most.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGTPase\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eEnzymatic reaction, certain\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGTPase\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eEnzymatic reactions may require additional metal ions or cofactors to enhance enzyme activity; refer to the relevant literature to determine whether their addition is necessary.\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:left\"\u003e\u003cspan style=\"margin-right: 8px;\"\u003e1)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003ePreparation\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e2X GTP\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eReaction solution:\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGTPase\/GAP\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eBuffer added\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGTP\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eTo\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e10 μM\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e,\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eDigital Terrestrial Television\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eTo\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e1 mM\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:left\"\u003e\u003cspan style=\"margin-right: 8px;\"\u003e2)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eUse\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGTPase\/GAP\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eBuffer for\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGTPase\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003ePerform gradient dilution\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e(\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eOr dilute to an appropriate concentration.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e, join\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e5 μL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eTo\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e384-\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eKong white experimental board\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:left\"\u003e\u003cspan style=\"margin-right: 8px;\"\u003e3)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eJoin\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e5 μL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eSteps\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e1\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003ePreparation\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e2X GTP\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eReaction solution\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:left\"\u003e\u003cspan style=\"margin-right: 8px;\"\u003e4)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eIncubation at room temperature\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e1hr-2hr\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e, The optimal incubation time may need to be determined based on the specific circumstances.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGTPase\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eOptimization\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:left\"\u003e\u003cspan style=\"margin-right: 8px;\"\u003e5)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eTo carry out\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGTPase\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eActivity assay; for detailed procedures, see\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e3.1\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eFestival\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGTPase\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eActivity Assay\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:left\"\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003e3.\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003e \u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003eGAP\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003eExciting\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003eGTPase\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003eEnzyme reaction\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:left\"\u003e\u003cspan style=\"margin-right: 8px;\"\u003e1)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003ePreparation\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e2X GTP-GAP\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eReaction solution:\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGTPase\/GAP\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eBuffer added\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGTP\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eto\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e10 μM\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e,\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eDTT\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eto\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e1 mM\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eand the corresponding\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGAP\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eprotein concentration\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e2x\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eat the set\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGTPase\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eenzyme reaction concentration\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:left\"\u003e\u003cspan style=\"margin-right: 8px;\"\u003e2)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eUsing\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGTPase\/GAP\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003ebuffer to perform\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003ea gradient dilution on\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGTPase\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e(\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eor dilute it to an appropriate concentration\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e, add\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e5 μL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eto\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e384-\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003ewell white assay plate\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:left\"\u003e\u003cspan style=\"margin-right: 8px;\"\u003e3)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eadd\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e5 μL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003efrom step\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e1\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eprepare\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e2X GTP-GAP\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003ereaction solution\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:left\"\u003e\u003cspan style=\"margin-right: 8px;\"\u003e4)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eincubate at room temperature\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003efor 1–2 hours\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003ethe optimal incubation time may need to be adjusted according to the specific\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGTPase\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eoptimized\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:left\"\u003e\u003cspan style=\"margin-right: 8px;\"\u003e5)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eperform\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGTPase\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eactivity assay; for specific procedures, see\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eSection 3.1\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e[\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGTPase\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eactivity assay]\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:left\"\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003e4.\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003e \u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003eGAP\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003eactivity assay\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:left\"\u003e\u003cspan style=\"margin-right: 8px;\"\u003e1)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eprepare\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e2X GTPase\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003ereaction solution:\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGTPase\/GAP\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003ebuffer added\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eDTT\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eto\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e1 mM\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eand\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGTPase\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003econcentration\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e2x\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eAt the set\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGTPase\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eenzyme reaction concentration\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:left\"\u003e\u003cspan style=\"margin-right: 8px;\"\u003e2)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eUsing a solution containing\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e10\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eμ\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eM GTP\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003ein the\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGTPase\/GAP\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003ebuffer to perform gradient dilutions of the relevant\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGAP\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eprotein\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e(\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eor dilute it to an appropriate concentration\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e, add\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e5 μL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eto\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e384-\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003ewell white assay plate\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:left\"\u003e\u003cspan style=\"margin-right: 8px;\"\u003e3)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eadd\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e5 μL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003estep\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e1\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eprepare\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e2X GTPase\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003ereaction solution\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:left\"\u003e\u003cspan style=\"margin-right: 8px;\"\u003e4)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eIncubate at room temperature\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003efor 1–2 hours\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e, the optimal incubation time may need to be adjusted according to the specific\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGTPase\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eoptimized\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:left\"\u003e\u003cspan style=\"margin-right: 8px;\"\u003e5)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eperform\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGTPase\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eactivity assay; for detailed procedures, see\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eSection 3.1\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003esection [\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGTPase\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eactivity assay]\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:left\"\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003e5.\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003e \u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003eGEF\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003eactivity assay\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:justify\"\u003e\u003cspan style=\"margin-right: 8px;\"\u003e1)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eprepare\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e2X GTPase-GAP\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003ereaction solution:\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGEF\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003ebuffer is added with\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eDTT\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eto reach\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e1 mM\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e,\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGTPase\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eand related\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGAP\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eprotein concentrations\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e2x\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eat the set\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGTPase\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eenzyme reaction concentration\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:justify\"\u003e\u003cspan style=\"margin-right: 8px;\"\u003e2)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eusing a solution containing\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e10\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eμ\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eM GTP\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eof\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGEF\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003ebuffer to dilute the relevant\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGEF\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003ePerform gradient dilution of the protein.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e(\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eOr dilute to an appropriate concentration.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e, join\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e5 μL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eTo\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e384-\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eKong white experimental board\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:justify\"\u003e\u003cspan style=\"margin-right: 8px;\"\u003e3)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eJoin\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e5 μL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eSteps\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e1\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003ePreparation\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e2X GTPase-GAP\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eReaction solution\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:justify\"\u003e\u003cspan style=\"margin-right: 8px;\"\u003e4)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eIncubation at room temperature\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e1hr-2hr\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e, The optimal incubation time may need to be determined based on the specific circumstances.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGTPase\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eOptimization\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:justify\"\u003e\u003cspan style=\"margin-right: 8px;\"\u003e5)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eTo carry out\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGTPase\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eActivity assay; for detailed procedures, see\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e3.1\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eFestival\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eGTPase\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eActivity Assay\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/div\u003e\u003ch4\u003eGuidelines\u003c\/h4\u003e\u003cdiv\u003e\u003cp style=\"margin-bottom: 0px;\"\u003e1) Mixing different batches is not recommended.\u003c\/p\u003e\u003c\/div\u003e","brand":"UA BIOSCIENCE","offers":[{"title":"1000assays","offer_id":42989601914955,"sku":"UA079051-1000assays","price":535.0,"currency_code":"USD","in_stock":true},{"title":"10000assays","offer_id":42989601947723,"sku":"UA079051-10000assays","price":2270.0,"currency_code":"USD","in_stock":true}],"thumbnail_url":"\/\/cdn.shopify.com\/s\/files\/1\/0590\/8375\/1499\/files\/05f7e407-5cd3-4351-9fde-7616580e8909.png?v=1785916842","url":"https:\/\/www.antbioinc.com\/products\/ua-glo-gtpase-activity-detection-kit-ua079051","provider":"AntBio","version":"1.0","type":"link"}