{"product_id":"t-cell-activationexpansion-kit-mouseruo-s0k1016","title":"T Cell Activation\/Expansion Kit, mouse（RUO）","description":"\u003ch4\u003eProduct Specification\u003c\/h4\u003e\u003cdiv class=\"responsive-table product-detail-table details-table\"\u003e\n\u003cbr\u003e\u003ctable style=\"width: 100%; height: auto;\"\u003e\u003ctbody\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"width: 22%;\"\u003e\u003cstrong\u003eReactivity\u003c\/strong\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"width: 78%;\"\u003eMouse\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"width: 22%;\"\u003e\u003cstrong\u003eStability \u0026amp; Storage\u003c\/strong\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"width: 78%;\"\u003e\u003cp\u003e避光保存于 2–8 ℃，不可冻存。\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003c\/tbody\u003e\u003c\/table\u003e\n\u003c\/div\u003e\u003ch4\u003eBackground\u003c\/h4\u003e\u003cdiv\u003e\u003cp\u003e\u003cspan\u003eMouse \u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eT\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e淋巴细胞是适应性免疫系统的核心效应细胞，主要分为\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eCD4\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e+\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e辅助性\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eT\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e细胞与\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eCD8\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e+\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e细胞毒性\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eT\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e细胞，在抗感染免疫、肿瘤免疫、免疫调节及自身免疫病发生过程中发挥关键作用。生理状态下，小鼠脾脏、淋巴结中的初始\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eT\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e细胞处于静息休眠状态，几乎\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e不\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e增殖、低表达功能分子，无法直接开展体外功能实验。因此，体外可控的\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eT\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e细胞活化与规模化扩增是小鼠免疫机制研究、细胞功能验证、免疫模型构建的核心基础技术；本试剂\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e盒采用\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e人工模拟抗原提呈细胞技术，通过生物素化\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eCD3ε\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e、\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eCD28\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e抗体偶联抗生物素磁珠，在体外精准复刻\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eT\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e细胞活化双信号，实现多克隆\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eT\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e细胞非特异性高效活化与扩增，适用于小鼠总\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eT\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e细胞、\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eCD4\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e T\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e、\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eCD8\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e \u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eT\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e细胞的批量扩增。磁\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e珠作为\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e固相载体，可同时富集大量\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eCD3ε\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e与\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eCD28\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e抗体，稳定结合\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eT\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e细胞表面对应受体，持续、均衡地提供第一信号与第二信号，规避天然抗原提呈的不稳定性，解决\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e小鼠原代\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eT\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e细胞体外难活化、增殖弱的种属特异性问题，大幅提升活化效率与扩增倍数。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/div\u003e\u003ch4\u003eProtocol\u003c\/h4\u003e\u003cdiv\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003e1.\u003c\/span\u003e \u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003e实验试剂\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e1.1\u003c\/span\u003e \u003cspan\u003e缓冲液：\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003epH7.2 PBS \u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e缓冲液，添加\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e 2 mM EDTA\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e，\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e2–8\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e℃\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e预冷；禁止使用含钙、镁离子的缓冲液\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\/\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e培养基\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e;\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e1.2\u003c\/span\u003e \u003cspan\u003e细胞培养基\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e: RPMI 1640\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e，添加\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e 10% \u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e胎牛血清（\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eFBS\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e）\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e+IL-2\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e（终浓度\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e 30–100 IU\/mL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e）\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e;\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e可选添加\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e50-100 \u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eμM\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e β-\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e巯基乙醇，维持快速增殖状态下细胞活力\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e;\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003e2.\u003c\/span\u003e \u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003e磁珠偶联（偶联\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003e CD3ε\/CD28 \u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003e抗体）\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e磁珠不含防腐剂，分装操作全程无菌；建议单次偶联\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e500μL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e磁珠，偶联后磁珠\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e2–8\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e℃\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e可稳定保存\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e3\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e个月，无需洗去未结合抗体。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e2.1\u003c\/span\u003e \u003cspan\u003e取\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e 2 mL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e无菌离心管，加入\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e 100 \u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eμL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e CD3ε-Biotin + 100 \u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eμL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e CD28-Biotin\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e，充分吹打混匀；\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e \u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e2.2\u003c\/span\u003e \u003cspan\u003e加入\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e300 \u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eμL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e \u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e缓冲液（\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003epH7.2 PBS\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e含\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e2 mM EDTA\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e）混匀；\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e2.3\u003c\/span\u003e \u003cspan\u003e充分涡旋\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e重悬磁珠\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e，保证磁珠均匀分散；吸取\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e 500 \u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eμL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e Streptavidin \u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eNanoBeads\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e加入上述抗体混合液，总体积\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e1 mL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e；\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e2.4\u003c\/span\u003e \u003cspan\u003e将离心管置于旋转架，\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e2–8\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e℃\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e低速持续旋转孵育\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e1 h\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e；得到偶联的\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eCD3ε\/CD28\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e的磁珠，后续可直接使用；\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e \u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003e3.\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003e \u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold\"\u003e实验步骤\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e所有操作全程无菌环境。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e3.1\u003c\/span\u003e \u003cspan\u003e样本制备\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e脾脏来源静息小鼠\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eT\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e细胞活化扩增，制备淋巴器官（脾脏、淋巴结）单细胞悬液。可使用磁珠分选\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eT\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e细胞进行活化扩增：阳性分选\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e CD3\/CD4\/CD8 T \u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e细胞：\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003eCD3ε Nanobeads Kit, mouse (RUO)\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e (Cat. No. S0K\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e0015\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e)\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e; \u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003eCD4 Nanobeads, \u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003eM\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003eouse\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e \u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e(RUO)\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e (Cat. No. S0K\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e0003\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e)\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e;\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e \u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003eCD8 Nanobeads,\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e Mouse \u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e(RUO)\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e (Cat. No. S0K00\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e05\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e)\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e; \u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e阴性分\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e选\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003eC\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003eD3\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e \u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e\/\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003eCD4\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e\/\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003eCD8\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e \u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003eT\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e细胞\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e：\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003eMouse T Cell Isolation Kit\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e (Cat. No. S0K\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e1008\/\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003eS0K3006\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e)\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e; \u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003eMouse CD4 T Cell Isolation Kit\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e (Cat. No. S0K\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e1005\/\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003eS0K300\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e3\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e)\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e;\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e \u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003eMouse CD8 T Cell Isolation Kit\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e \u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e(Cat. No. S0K\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e1007\/\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003eS0K300\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e4\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e)\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e \u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e具体操作参照对应产品说明书\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e3.2\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eT \u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e细胞活化与扩增操作\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e本方案基础体系适用于\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e1×10\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e⁶\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e个\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e分选后的\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eT\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e细胞\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e对应\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e20 \u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eμL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e偶联后的磁珠，细胞量翻倍时所有试剂体积同步放大。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:left\"\u003e\u003cspan\u003e3.2.1\u003c\/span\u003e \u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e取分选后的细胞按\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e1×10⁶\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e\/\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003emL\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e重悬在\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e新鲜完全培养基（\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003eRPMI1640 +10% FBS +30–100 IU\/mL IL-2\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e）\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e中\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e, \u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e取\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e1m\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003eL\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e细胞\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e至离心管\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e中，\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e充分混匀偶联磁珠\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e，加入\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e20 \u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003eμL\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e偶联的\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e磁珠\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e，\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e400 g \u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e离心\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e7 min\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e；\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e（\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e阴性对照：使用未偶联空白磁珠替代\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e偶联\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e磁珠；\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e）\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e3.2.2\u003c\/span\u003e \u003cspan\u003e离心完，弃上清，沉淀重悬于\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e1 mL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e新鲜完全培养基（\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eRPMI1640 +10% FBS +30–100 IU\/mL IL-2\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e）\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e,\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e将细胞加入对应的孔板中培养，为保证最佳刺激与增殖效果，推荐使用铺板标密度：\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e1×10\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e⁶\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e细胞\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e \/cm²\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e；\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp style=\"text-align:left\"\u003e\u003cspan\u003e各培养板最优培养体系配比表\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003ctable border=\"1\" style=\"border-collapse:collapse;width:auto;border:1px solid #000000\"\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold;color:#000000\"\u003e培养板型号\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold;color:#000000\"\u003e生长底面积\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold;color:#000000\"\u003e培养总\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold;color:#000000\"\u003e体积\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold;color:#000000\"\u003eT \u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold;color:#000000\"\u003e细胞接种数量\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"font-weight:bold;color:#000000\"\u003e偶联磁珠的用量\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e96 \u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e孔板\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e0.31cm²\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e0.2 mL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e0.\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e25\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e×10\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e⁶\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e5\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e \u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003eμL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e48 \u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e孔板\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e1 cm²\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e1 mL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e1×10\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e⁶\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e20 \u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003eμL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e24 \u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e孔板\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e2 cm²\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e2 mL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e2×10\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e⁶\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e4\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e0 \u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003eμL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e12 \u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e孔板\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e4 cm²\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e4 mL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e4×10\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e⁶\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e8\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e0 \u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003eμL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e6 \u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e孔板\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e10 cm²\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e5 mL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e5×10\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e⁶\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003ctd style=\"text-align:center;vertical-align:middle\"\u003e\u003cp style=\"text-align:center\"\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e10\u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003e0 \u003c\/span\u003e\u003cspan style=\"color:#000000\"\u003eμL\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003c\/table\u003e\n\u003cbr\u003e\u003cp\u003e\u003cspan\u003e3.2.3\u003c\/span\u003e \u003cspan\u003e将培养板置于\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eCO₂\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e培养箱中培养，每日观察细胞状态，培养基不足及时补加；\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e3.2.4\u003c\/span\u003e \u003cspan\u003e培养至第\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e2\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e天，轻柔吹散细胞团块，此步可取样进行流式检测\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003emouse CD25, mouse CD69\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e看细胞激活情况\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e;\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e3.2.5\u003c\/span\u003e \u003cspan\u003e传代扩增：每\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e2\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e天按\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e 1:2 \u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e或\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e 1:4 \u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e比例分瓶，补充新鲜培养基，增殖过快可缩短传代间隔\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e;\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e3.2.6\u003c\/span\u003e \u003cspan\u003e二次刺激：活化培养\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e 6–8 \u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e天后，\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003eT \u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e细胞进入静\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e息\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e状态，如需持续扩增需再次加磁珠重刺激。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e3.3\u003c\/span\u003e \u003cspan\u003e磁珠去除操作\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e若下游需进行磁珠分选、更换刺激抗原、刺激剂时，需提前去除磁珠：\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e3.3.1\u003c\/span\u003e \u003cspan\u003e收集细胞转移至\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e 5\/15\/50 mL \u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e离心管，缓冲液洗涤一次；\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e3.3.2\u003c\/span\u003e \u003cspan\u003e缓冲液重悬细胞，最高浓度\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e 2×10\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e⁷\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e细胞\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\/mL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e，充分吹散混匀；\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e3.3.3\u003c\/span\u003e \u003cspan\u003e将离心管固定于磁力分离器上，静置吸附\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e10 min;\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp\u003e\u003cspan\u003e3.3.4\u003c\/span\u003e \u003cspan\u003e将细胞转移至新离心管，收集得到无磁珠的细胞，可开展后续实验。\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/div\u003e","brand":"Starter","offers":[{"title":"200T","offer_id":42920108884043,"sku":"S0K1016-200T","price":420.0,"currency_code":"USD","in_stock":true}],"thumbnail_url":"\/\/cdn.shopify.com\/s\/files\/1\/0590\/8375\/1499\/files\/AntBioImage_7fa6845b-0e3f-4c9b-9764-fab393672ffb.png?v=1784631674","url":"https:\/\/www.antbioinc.com\/products\/t-cell-activationexpansion-kit-mouseruo-s0k1016","provider":"AntBio","version":"1.0","type":"link"}